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ユビキチン化? トピック削除
No.4236-TOPIC - 2007/05/17 (木) 22:56:01 -
現在、あるタンパクを過剰発現させた時の分解されやすさをタンパクのユビキチン化ではないかと考え、MG132を用いたウエスタンブロットを検討中です。1回目に行った結果、MG132を加えたタンパクではバンドの変化が見れず、加えていないタンパクに上流にバンドが見られました。予想していた結果と逆の結果なので、どなたかアドバイスをいただければ幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.4236-4 - 2007/05/19 (土) 03:58:05 - おお
>MG132を加えたタンパクではバンドの変化が見れず

何に対して変化があったのでしょうか。加えていないものに対して変化がないと考えると"加えていないタンパクに上流にバンドが見られました"というのはなんかよく分かりません。

目的のタンパクでIPして、ユビキチンで検出できるかとか、ユビキチンの抗体でIPして目的のタンパクの抗体で検出できるかなどを見る方が直接的だと思いますがいかがでしょうか?あと細胞ですからサイズだけで判断するばあい間接的効果もがえないといけないですね(あるタンパクがあなたの目的のたんぱく質の修飾を制御していて、そのたんぱく質がユビキチンによって制御されているとか)。

(無題) 削除/引用
No.4236-3 - 2007/05/18 (金) 11:13:34 -
MG132を加えていない場合に現れるバンドの上流という意味です。

(無題) 削除/引用
No.4236-2 - 2007/05/18 (金) 10:53:48 - ?
上流?

ユビキチン化? 削除/引用
No.4236-1 - 2007/05/17 (木) 22:56:01 -
現在、あるタンパクを過剰発現させた時の分解されやすさをタンパクのユビキチン化ではないかと考え、MG132を用いたウエスタンブロットを検討中です。1回目に行った結果、MG132を加えたタンパクではバンドの変化が見れず、加えていないタンパクに上流にバンドが見られました。予想していた結果と逆の結果なので、どなたかアドバイスをいただければ幸いです。

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