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翻訳停止に関する論文 トピック削除
No.4357-TOPIC - 2007/06/05 (火) 21:33:17 - RS
No.4287-TOPIC『大腸菌が持つプロテアーゼ』の続きになる質問なのですが、よろしくお願いします。

現在、大腸菌Rosetta(DE3)で真核生物由来のタンパク質を発現させ、封入体として発現産物を得ました。
その発現産物(未精製)のSDS-PAGE解析の結果、アミノ酸配列から推定したタンパク質分子量(72 kDa)よりも約10 kDa低い約65 kDa付近にバンドが検出されました。

以前はプロテアーゼの事に関してご指摘頂いたのですが、
今度は『翻訳停止』の可能性に関してご教授頂きたいと思います。

mRNAが不安定であることや、コドンの使用頻度の問題により翻訳がうまく進行しなかったのではないかという考えを持っております。
私の研究室の助教授が、以前、このような内容が記された論文を見たことがあるとを助言頂いたので、気になってしょうがないのです・・・

そこで、「大腸菌による異種タンパク質の発現で、翻訳停止により完全長のタンパク質を得ることができなかった」というような論文をお知りの方は是非教えて頂きたいと思います。
キーワードに『premature translation termination』とか挙げて調べているのですが、なかなか見つからず、困っています。

よろしくお願いします。
 
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tmRNA 削除/引用
No.4357-3 - 2007/06/06 (水) 23:46:25 - RS
ミスフォールドや何らかの影響で未完成なタンパク質は、異物として消化される運命を辿ることは、以前、今大腸菌で発現しているタンパク質と同様のものを酵母Pichia pastorisで生産していた時に勉強して知っていましたが・・・

やはし、大腸菌にもそのようなシステムがあるんですねぇ〜。
って、当然ですよね・・・同じ生物なのですから。

tmRNAの事、勉強不足で知りませんでした・・・
参考にします。
ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.4357-2 - 2007/06/06 (水) 11:12:56 - tmRNA
翻訳が途中で停止して合成に失敗したようなタンパク質は、翻訳産物の品質管理機構によりすみやかに分解されてしまうと考えられていると思いますが。

http://nature.cc.hirosaki-u.ac.jp/kohou2/public/oyo/h.himeno/theme.htm
http://www.icube-t.co.jp/ribosome/news_re/vol_09/p07.html

翻訳停止に関する論文 削除/引用
No.4357-1 - 2007/06/05 (火) 21:33:17 - RS
No.4287-TOPIC『大腸菌が持つプロテアーゼ』の続きになる質問なのですが、よろしくお願いします。

現在、大腸菌Rosetta(DE3)で真核生物由来のタンパク質を発現させ、封入体として発現産物を得ました。
その発現産物(未精製)のSDS-PAGE解析の結果、アミノ酸配列から推定したタンパク質分子量(72 kDa)よりも約10 kDa低い約65 kDa付近にバンドが検出されました。

以前はプロテアーゼの事に関してご指摘頂いたのですが、
今度は『翻訳停止』の可能性に関してご教授頂きたいと思います。

mRNAが不安定であることや、コドンの使用頻度の問題により翻訳がうまく進行しなかったのではないかという考えを持っております。
私の研究室の助教授が、以前、このような内容が記された論文を見たことがあるとを助言頂いたので、気になってしょうがないのです・・・

そこで、「大腸菌による異種タンパク質の発現で、翻訳停止により完全長のタンパク質を得ることができなかった」というような論文をお知りの方は是非教えて頂きたいと思います。
キーワードに『premature translation termination』とか挙げて調べているのですが、なかなか見つからず、困っています。

よろしくお願いします。

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