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制限酵素で切れません トピック削除
No.4417-TOPIC - 2007/06/15 (金) 16:19:48 -
教えてください.

あるベクターを異なる2つの制限酵素(AとBとします)で切断したいのですが,一つの酵素(A)が切れません.

しかし,別の2つの制限酵素(AとCとします)ではAもCも切れています.

バッファーもA,Bともに共通のバッファーが推奨されているので,バッファーの愛称ではないと思われます.

このような場合,A,Bで切断する方法はありますか?御教授下さい
 
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(無題) 削除/引用
No.4417-4 - 2007/06/16 (土) 00:24:06 - メロン屋さん
詳しくはわかりませんが、AとBの制限酵素部位が近接していませんか?

あまり近いと、Bで切られたあとに、Aの足場がなくて切断できないことがありますよ。

(無題) 削除/引用
No.4417-3 - 2007/06/15 (金) 16:43:31 - gene
まず思い浮かぶのは
・dam/dcm methylationの影響のある配列、酵素である
・スーパーコイルにききにくい類の酵素である


わざわざ伏せ字にすることないと思いますので、もう少し具体的な情報をください。そうしたら、もっとも高い可能性を指摘できると思います。

A, B, Cはなんですか?
ベクターの種類は?空のベクターですか(それじゃあどっちが切れてどっちが切れてないか分からないか、、、、)、それとも何かクローニングしたもの?
どうやって入手したもの?(市販品、自前で精製?精製方法は?)

(無題) 削除/引用
No.4417-2 - 2007/06/15 (金) 16:24:45 - RE
Aだけで切れば切れるんなら、「Aで切断→フェノール抽出→エタノール沈殿→Bで切断」では?

制限酵素で切れません 削除/引用
No.4417-1 - 2007/06/15 (金) 16:19:48 -
教えてください.

あるベクターを異なる2つの制限酵素(AとBとします)で切断したいのですが,一つの酵素(A)が切れません.

しかし,別の2つの制限酵素(AとCとします)ではAもCも切れています.

バッファーもA,Bともに共通のバッファーが推奨されているので,バッファーの愛称ではないと思われます.

このような場合,A,Bで切断する方法はありますか?御教授下さい

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