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recombinationによる変異株作製 トピック削除
No.4430-TOPIC - 2007/06/18 (月) 15:29:34 - Z
sucide vector(pCVD442)を使って、大腸菌に変異を導入しようと試みているのですが、うまくいきません。


一般にhomologous recombinationを利用する場合、大腸菌の遺伝型はrecA+であれば問題ないと考えているのですが、何か、その他に注意しなければいけないことがあるのでしょうか?
市販されているようなrecA+ strain(BL21など)で成功された方はいらっしゃらないでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.4430-3 - 2007/06/19 (火) 14:34:19 - Z
書き込みありがとうございます。

確かにそうですね。
エレクトロポレーションを使っているので、それほど効率が悪いとは思わないのですが、考えて見たいと思います。

(無題) 削除/引用
No.4430-2 - 2007/06/19 (火) 09:47:06 - a
BL21ってコンピテンシーはどうでしたかね?
BL21(DE3)はかなり低かった記憶がありますが。

素人考えですが、コンピテンシーが低いと目的のクローンも取れにくくなりませんか?

recombinationによる変異株作製 削除/引用
No.4430-1 - 2007/06/18 (月) 15:29:34 - Z
sucide vector(pCVD442)を使って、大腸菌に変異を導入しようと試みているのですが、うまくいきません。


一般にhomologous recombinationを利用する場合、大腸菌の遺伝型はrecA+であれば問題ないと考えているのですが、何か、その他に注意しなければいけないことがあるのでしょうか?
市販されているようなrecA+ strain(BL21など)で成功された方はいらっしゃらないでしょうか?

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