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(無題) 削除/引用 No.4435-4 - 2007/06/26 (火) 18:02:56 - めだやん 軟部肉腫のホルマリン固定パラフィンブロックからProK、TRIzolを使ってRNAを抽出しました。融合遺伝子の発現をPCRで検討しましたが、200bpの増幅は出来ました。いくつか論文も出ていますので頑張ってください。

(無題) 削除/引用 No.4435-3 - 2007/06/24 (日) 04:23:37 - ぱらふぃん kawaさん、ありがとうございます。 論文、大変参考になりました。 頑張ってみます。

(無題) 削除/引用 No.4435-2 - 2007/06/21 (木) 19:48:41 - kawa タンパクとRNAがクロスリンクしているのでProKを使わないといけないようです。使われているキットはそうしているのだと思いますが、それだけだとRNAの修飾がまだあるためPCRはかかりにくく、熱で脱修飾するとずいぶん改善するようですよ。 http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?tool=pubmed&pubmedid=10536153 あたりが参考になるかも。

パラフィン切片からのRNA抽出 削除/引用 No.4435-1 - 2007/06/19 (火) 09:31:37 - ぱらふぃん 大腸がんのパラフィン切片からRNAを抽出し、cDNAを作ってRT-PCRをしたいのですが、私の前任者がInvitrogenやRocheのキットを使用し何度もチャレンジしたものの失敗した（量がとれない）と聞かされました。 使用してよかったキット、もしくは方法などご存知の方がいらっしゃいましたら教えてください。 それと、RT-PCRで増幅したいバンドのサイズは最大で400bpくらいなのですが、これは可能でしょうか。以前、パラフィン切片からのRNA由来だとせいぜい100bpくらいまでしか増幅できないと聞いたことがあるのですが。

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