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インプット。 トピック削除
No.4483-TOPIC - 2007/06/29 (金) 02:37:06 - 研修生
免疫沈降やPulldownなどで目的のタンパクがどの程度の効率で結合、回収されてきたかを調べるために、assayを行う前のサンプルをインプット(INPUT)としてSDS-PAGEで泳動し、WBなどを行い、シグナルの強度を比較することがあるとおもいます。

実際に、インプットは〜%という表現が論文ではされていますが、具体的にどのように考えて、計算すればよいか分かりません。
とっても基本的なことで知らないこと自体恥ずかしいのですが、どなたか教えていただきたいと思います。よろしくお願いします。
 
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同じことを考えたことがあるので・・・便乗。 削除/引用
No.4483-4 - 2007/07/16 (月) 09:57:38 - KP
奴隷さんと同じ定義を考えていましたが、まわりに確認できる人がおらず、悶々としておりました・・・。やっぱり頼りに成りますね、このサイトは。

>leaさん
可溶画分だけでしょうね。"input"という字面通り解釈するならば。
プレクリアもしていたならプレクリア後上清ということになるのかな??

"...input is x% of lysate..."のような表現を見かけることもありますが、奴隷さんの定義と同じものをさすのでしょうかね?

Lysateが500μLで"input"laneに10μL流したから1/50 input、というのでは、その数字が客観的に何を意味するのか全くわかりませんが・・・。いかがでしょうか?みなさま。。。

input 削除/引用
No.4483-3 - 2007/07/03 (火) 04:56:12 - lea
便乗ですいませんがそれはlysate作成時Buffer全体(つまり細胞全体とほぼ同じと思われます)をinputとして用いるのですか、それともそのBufferに可溶性の部分だけを(遠心した上澄みのみ)inputにするのですか。当然IPには可溶性の物を投与しますが。教えてください。

(無題) 削除/引用
No.4483-2 - 2007/06/29 (金) 10:29:08 - 奴隷
例えば500μLのlysateのうち、400μLをIPに用いて得られた沈降物の半分を電気泳動に回し、lysateの10μLをinputとして同時に泳動したとすると、IPのレーンには200μL分が乗ってる計算になるので、inputは5%ということになります。

インプット。 削除/引用
No.4483-1 - 2007/06/29 (金) 02:37:06 - 研修生
免疫沈降やPulldownなどで目的のタンパクがどの程度の効率で結合、回収されてきたかを調べるために、assayを行う前のサンプルをインプット(INPUT)としてSDS-PAGEで泳動し、WBなどを行い、シグナルの強度を比較することがあるとおもいます。

実際に、インプットは〜%という表現が論文ではされていますが、具体的にどのように考えて、計算すればよいか分かりません。
とっても基本的なことで知らないこと自体恥ずかしいのですが、どなたか教えていただきたいと思います。よろしくお願いします。

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