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NBT/BCIP の安定性 トピック削除
No.4515-TOPIC - 2007/07/06 (金) 07:05:11 - 久しぶりのモレキュラー
in situ hybridization を行う為に DIG 標識された RNA プローブを作成し、希釈系列を作ってメンブレンにブロットして AP-NBT/BCIP 反応で可視化しました。室温で60分間反応させても全く発色しません。
RNA プローブを 電気泳動するときちんとバンドは見えます。

両試薬は使用期限が１年、半年それぞれ切れています。-20℃で保存されていたのですがこんなに一気に反応しなくなる物でしょうか？
　
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(無題) 削除/引用
No.4515-4 - 2007/07/06 (金) 21:27:01 - のん
AP標識抗DIG抗体も失活しているかもしれませよ。
NBT/BCIPと併せて疑ってみる必要があるかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.4515-3 - 2007/07/06 (金) 18:07:46 - a
-20℃保存で1年以上たちますが使用できています

(無題) 削除/引用
No.4515-2 - 2007/07/06 (金) 11:04:08 - そば
AP標識抗DIG抗体を直接NBT/BCIP発色液に入れてみてください。
発色反応が起きるかどうかで、一応の確認は出来ますよ。

NBT/BCIP の安定性 削除/引用
No.4515-1 - 2007/07/06 (金) 07:05:11 - 久しぶりのモレキュラー
in situ hybridization を行う為に DIG 標識された RNA プローブを作成し、希釈系列を作ってメンブレンにブロットして AP-NBT/BCIP 反応で可視化しました。室温で60分間反応させても全く発色しません。
RNA プローブを 電気泳動するときちんとバンドは見えます。

両試薬は使用期限が１年、半年それぞれ切れています。-20℃で保存されていたのですがこんなに一気に反応しなくなる物でしょうか？
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