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転写因子の発現量 トピック削除
No.4517-TOPIC - 2007/07/06 (金) 15:53:12 - KK
ある転写因子を免疫沈降で落としてきて、銀染色で見たいと思っています。
ウエスタンブロットで存在は確認できているのですが、銀染色では見えません。
転写因子は一般的に存在量が少ないものだとは思いますが、
培養細胞(哺乳類)を何個くらい用意すれば、バンドが見えるようになるものでしょうか?
細胞の種類、転写因子の種類によって変わるものだとは思いますが、おおよその目安を知っている方は教えていただけないでしょうか。
よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.4517-3 - 2007/07/06 (金) 18:05:13 - a
免沈したサンプルだと抗体のバンドが強烈にでると思います。
銀染すると真っ黒になると思います。

(無題) 削除/引用
No.4517-2 - 2007/07/06 (金) 16:29:08 - T
試薬にもよりますが、ウェスタンを化学発光法で検出する場合、最小でフェムトグラム(10のマイナス15乗)オーダーの蛋白が検出できます。
一方で、銀染で検出できる蛋白はナノグラム(10のマイナス9乗)オーダーです。
従って、感度の差は最大で10の6乗になりますので、ウェスタンで使用する量の100万倍の蛋白が必要になる可能性があります。

転写因子の発現量 削除/引用
No.4517-1 - 2007/07/06 (金) 15:53:12 - KK
ある転写因子を免疫沈降で落としてきて、銀染色で見たいと思っています。
ウエスタンブロットで存在は確認できているのですが、銀染色では見えません。
転写因子は一般的に存在量が少ないものだとは思いますが、
培養細胞(哺乳類)を何個くらい用意すれば、バンドが見えるようになるものでしょうか?
細胞の種類、転写因子の種類によって変わるものだとは思いますが、おおよその目安を知っている方は教えていただけないでしょうか。
よろしくお願いいたします。

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