BioTechnicalフォーラム [リンパ球増殖試験]

リンパ球増殖試験

No.4519-TOPIC - 2007/07/07 (土) 20:29:50 - 免疫初心者

門外漢なもので、初歩的な質問をお許しください。

リンパ球の増殖を胸腺、脾臓、末梢血などを用いて行いたいのですが、
適当なプロトコールが見つかりません。
ラボも分子生物学に詳しくなく困っています。

どなたかお教え願えないでしょうか？
（LPSなどを使うこともあるのでしょうか？）
　

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(無題)

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No.4519-9 - 2007/07/26 (木) 16:26:44 - Sandiegan

FCSに関しては事前に、FCS単独でリンパ球芽球化反応を惹起しないロットをチェックしてました。
このFCSを用いてケースバイケースですが１～１０％の濃度で用いておりました。

LPSですが、私はE.coliのものを用いていました。
他は使ったことがありませんのでよく分かりません。

LPS

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No.4519-8 - 2007/07/24 (火) 22:38:49 - Leon

便乗質問です。
LPSを購入しようと考えていますが、
Sigmaでも多種類が販売されています。
どれを使えばいいのでしょうか？
論文でも書いていないものもあります。

培養液の条件

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No.4519-7 - 2007/07/21 (土) 01:41:19 - 実験

何度もすみません。
LPSで刺激をかけるときに、FCSとかはどうしておられるでしょうか？
実験系で結構ちがった条件でやっているようなので、
ちょっと気になってお尋ねします。

ちょっと遅い回答ですが

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No.4519-6 - 2007/07/18 (水) 14:48:45 - Sandiegan

T細胞、B細胞どちらを標的にするかで変わってきます。
T細胞の場合プリリンさんのおっしゃるようなCD3コーティングも一つですし、PHAやConAと言ったレクチンを使う方法もあります。
B細胞ではLPSが一般的な刺激剤だと思います。
T.B両方共に反応するのがPWM（これもレクチンの一つ）だと記憶しています。
私自身はPHA、ConA、LPSなどを用いトリチウムチミジンの取り込みで見ていました。
文献と言うわけではないですが免疫実験操作法I,II（南江堂）の中に「細胞増殖反応」という項目があり詳しく書かれています。
他にも、リンパ球機能検索法（中外医学社）など日本語の免疫実験操作に関する成書が幾つかあると思います。

文献

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No.4519-5 - 2007/07/10 (火) 21:52:25 - 免疫初心者

有難うございます。
上の者に説明するために適当な文献があったらお教えいただきたいのですが。

(無題)

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No.4519-4 - 2007/07/10 (火) 12:23:16 - プリリン

> 組織からの細胞単離では、FACSなどでT、B細胞を分離しないといけないのでしょうか？

分離はしていませんでした。
添加する薬剤に対して、反応する細胞が異なる、との認識でおります。

有難うございます

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No.4519-3 - 2007/07/09 (月) 20:00:38 - 免疫初心者

プリリンさん、有難うございます。

リンパ球の増殖を考える時に、
T,B細胞で反応がちがうのでしょうが、
組織からの細胞単離では、FACSなどでT、B細胞を分離しないといけないのでしょうか？