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(無題) 削除/引用 No.4558-5 - 2007/07/19 (木) 22:03:02 - しまず ありがとうございます。ソニケーションやってみます。

(無題) 削除/引用 No.4558-4 - 2007/07/19 (木) 15:01:50 - ひろ じゃーソニケーションかベンゾネース使って核のDNAを壊してください。ペレットなくなりますよ！

(無題) 削除/引用 No.4558-3 - 2007/07/19 (木) 14:48:05 - しまず TCAで濃縮かけてはやってみたんですけど上手くいきません。ひとつ気になったのですが、最初のbufferAで遠心して得られる核ペレットに、bufferCを加えても核ペレットが全然溶けないんですよね。これって核内のタンパクがbuffer中に溶出してないってことなんでしょうか？ちなみに細胞質タンパクについては十分量とれているのですが。

(無題) 削除/引用 No.4558-2 - 2007/07/18 (水) 11:44:09 - ひろ それなら十分見られると思いますよ。それでもバンド薄いなら、タンパク質を濃縮するか、IPして見れませんか？？

核タンパクの抽出について 削除/引用 No.4558-1 - 2007/07/17 (火) 17:06:08 - しまず 基本的な質問ですみません。 今、転写因子の核移行をみているのですが、普通、核タンパクを十分量とるためには、細胞はどのくらいの規模で撒けばいいのでしょうか？私は現在のところ1×106/3ml/60φでやってるのですが、ウェスタンのバンドが非常に薄いです。ポジコンはちゃんと出てるのでたぶん絶対的なタンパク量が少ないと思うのですが・・よろしくお願いします。

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