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お奨め 削除/引用 No.4606-5 - 2007/12/25 (火) 22:27:23 - T氏 VIVASPIN（どこの会社か覚えてません。実験室にいくのがめんどくさくて。）お奨めです。上方や下方に（圧力のかかる方向に）限外ろ過膜があると限外ろ過膜にタンパクが吸着しやすく、その部分のタンパク濃度が高くなってタンパクの凝集がおこりやすいです。その分このVIVASPINは横に限外ろ過膜がついているため単純な原理ですがとてもすぐれた性能を発揮します。一度試してみたらわかります。

(無題) 削除/引用 No.4606-4 - 2007/08/11 (土) 16:56:55 - mm どうしてもロスは避けられませんが、以下の点に注意するとよいでしょう。 １）5%Teen20、5%SDS、1%CHAPS等を容器に１晩満たしておき、使用前にDWですすいでから一度通過させる。 ２）容量の小さな濾過器を選び、繰り返し試料を補充して遠心する。 ３）許容遠心力の半分程度で遠心し、可能ならスイングローターを用いる。 ４）回収後、少量のバッファで洗浄して再回収する。 なお、濃縮器はどれを選ぶか難しいと思いますが、個人的にはアミコンウルトラが好みです。

(無題) 削除/引用 No.4606-3 - 2007/08/10 (金) 19:51:30 - ポスドク タンパク質を濃縮するとき気をつけていることとして、タンパク質溶液が白濁して、タンパク質が沈殿していないかどうかです。白濁沈殿した場合、それ以上濃縮しないとか、溶解し易い条件を見つけるべきと思います。限外濃縮膜については様々な会社で売られており、どれがいいかよくわかりません。使い易いか否かで選ぶできかと。

(無題) 削除/引用 No.4606-2 - 2007/07/25 (水) 08:41:57 - 名無し 精製の初期でまだきょう雑蛋白質が多いときはそういうのがいい感じで非特異的に膜にくっついたりするので、精製したい蛋白質の吸着はあるていど抑えられるけど、精製後期とか精製品みたくでだんだん綺麗になってきたやつは、くっついてなくなることが多いからそういうのにはあまり薦めない。製品の問題というよりもむしろ蛋白質側の事情とおもう。濃度が薄いと特に。吸着しやすい蛋白質もあるし。（濃縮するのになんか変だけど）あるていど濃いサンプルを使うとか、これは低吸着です、みたいな膜をつかうとか、（目的によってはいいかどうかわからないけど膜のブロッキングという意味で）BSAみたいの混ぜるとか。が対策として考えられる。

蛋白質の濃縮について 削除/引用 No.4606-1 - 2007/07/25 (水) 00:35:41 - エアロ 精製した蛋白質を濃縮するときにいろんな濃縮器(アミコン、セントリコン？）を使うと思うのですが、ロスしやすいしにくいというのは製品によって決まっていたり、蛋白質の性質や分子量によってある程度予想できたりするものなのでしょうか？またそれらの濃縮器の使い方で気をつけるべきことがありましたらなんでも結構なので教えていただけないでしょうか。

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