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(無題) 削除/引用 No.1180-4 - 2008/05/23 (金) 16:31:51 - おお http://www.sigmaaldrich.com/catalog/search/ProductDetail/SIGMA/A1080 Flag M1は、カルシウム依存性なので溶出、再生が楽と思いますが、、、質問の本質とはかけ離れてますが、、、、

(無題) 削除/引用 No.1180-3 - 2008/05/23 (金) 12:24:42 - M2gel >"さん 私は細胞lysis液にナカライのホスファターゼインヒビターカクテルを用いているのですが、もしかしたらその中にリン酸化阻害剤としてオルトバナジン酸がはいっているのかもしれませんね。 全く現象は同じです。 とても参考になりました。 ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.1180-2 - 2008/05/22 (木) 20:15:26 - ~ 固まったのが遠心のかけすぎなのか、何らかの成分と反応してしまったのか分かりませんが、 色については、オルトバナジン酸でオレンジ色になる場合があるようですが、溶液中に入れていませんか？ http://www.kenkyuu.net/cgi-biotech/biotechforum.cgi?mode=view;start=1;Code=1420 解決策がないスレなので、原因だったとしても、対応の使用が分かりませんが。 価格については、こちらは参考になりますでしょうか？ http://www.kenkyuu.net/cgi-biotech/biotechforum.cgi?mode=view;Code=84 私は価格を見ていませんが、自作したほうが安くなるようです。 また、カラムに詰めることでうまくいきそうでしたら、 ツベルクリン用注射器などの径の小さいチューブで、自作カラムを作製してみてはいかがでしょうか。 300uL詰めて、3回以上再生できれば、100uL使い捨てよりも安く上がります。

M2gelによるFLAG融合タンパク質の精製 削除/引用 No.1180-1 - 2008/05/21 (水) 21:42:24 - M2gel いつもお世話になっております。 現在、あるタンパク質を解析するためにFLAGを融合した形でタンパク質を発現させ、それを大量に精製したいと考えております。 発現させたFLAG融合の目的のタンパク質を動物細胞から抽出して、シグマのM2gelを用いてアフィニティー精製することを考えております。 以前、バッチ法により目的タンパク質をうまく回収できたのですが、使用したM2gelが黄色くなって少し固まってしまい、再生することができませんでした。使用したgelのボリュームは100μlです。 M2gelはとても高価なので、カラムにつめて行うという方法がうちの研究室ではできません。 何か再生して使える良い方法はないでしょうか？ アドバイスいただけたら幸いです。

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