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(無題) 削除/引用 No.1184-8 - 2008/05/24 (土) 13:45:28 - KO ＲＩを用いたin vivoのメチル化検出については、 この論文を参考にされるといいかもしれません。 In vivo and in vitro arginine methylation of RNA-binding proteins.Liu Q, Dreyfuss G. Mol Cell Biol. 1995 May;15(5):2800-8

(無題) 削除/引用 No.1184-7 - 2008/05/24 (土) 10:23:14 - qq あまりお勧めな気がしませんが、 手元にRIがあって、何から手を付けたら良いのか判らないときは、ホモジネートも選択肢かもしれません。でも、細胞でのメチル化を見ていることにはなりませんよね。 3H標識のオートラジオグラフィーは、かなり大変そうですがそこらあたりはOKなのでしょうか？ メチル標識の3H-AdoMetは市販されているのですね？ AdoMetの細胞内取り込みがうまくいけば良いのですが、如何なのでしょう? それで、3H-Metで入れて、タンパク合成を抑えておけば、いくらかAdoMetに残るかなと思った訳です。

(無題) 削除/引用 No.1184-6 - 2008/05/23 (金) 16:06:35 - ryo すみません。抗体のメーカーはすぐには分かりません。 qqさんの仰る方法を考えると、細胞抽出液に3H標識S-adenosyl methionineを加えてincubateするというのも考えられるでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.1184-5 - 2008/05/23 (金) 14:57:02 - qq 想像なのですが、「3H標識S-adenosyl methionineを細胞培養液」よりも3H-Methionine + cycloheximideではないでしょうか？ そうでなければ、細胞をdigitonineやstreptolysin-Oで透過性にして、3H標識S-adenosyl methionineで短時間標識か？？？

(無題) 削除/引用 No.1184-4 - 2008/05/23 (金) 14:03:49 - 抗体 横レスすみません。 メチル化の抗体ですが、具体的のどのメーカーのどの製品をお使いになったのでしょう？また、その他のメーカーのものも試されましたか？ 抗体やMS以外でよい方法があるなら私も気になります。

(無題) 削除/引用 No.1184-3 - 2008/05/22 (木) 22:32:13 - ryo ありがとうございます。 サイトの候補はあり、変異を入れる事により活性が変化する事まではわかっています。 Massは試みましたが、判定不能でした。

(無題) 削除/引用 No.1184-2 - 2008/05/22 (木) 19:55:56 - ~ メチル化のサイトは気にしていないのでしょうか？ Masspectrometryでメチル化サイトを同定している論文を見かけたことがあります。

細胞内メチル化の標識 削除/引用 No.1184-1 - 2008/05/22 (木) 19:25:48 - ryo 細胞内のある蛋白がメチル化されるているかを知りたいと考えていますが、メチル化検出抗体はワークしませんでした。この様な場合、他にどのような方法があるでしょうか？ 例えば、3H標識S-adenosyl methionineを細胞培養液に加え、メチル化蛋白を標識する事は可能でしょうか？ どなたでもヒントでも頂けたらと考えています。 よろしくお願い致します。

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