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グリセロールストックについて トピック削除
No.1200-TOPIC - 2008/05/27 (火) 19:15:55 - 修行中
グリセロールストックを使用するときは凍ったまま、一部を削り取って用いるという記述を発見したのですが、本当ですか?こういうやりかたが一般的なんでしょうか?私はこれまで、溶かしてから少量まいていました。。。以外に他人がグリセロールストックを扱う場面なんて見かけないもんで、、皆さんはどうされてますか?
http://oshiete1.goo.ne.jp/qa2080160.html
 
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No.1200-7 - 2008/05/28 (水) 11:01:47 - ~
私は、安全キャビネットの中に常備されている、
滅菌済みイエローチップでストリークしています。

10cmdishの1/6位をストリークして、そこの一部を伸ばすようにさらに1/6にストリークして…
というのを繰り返して、シングルになったところからピックアップしています。
ストリークする際に、最後に習字の払いのように、ピッと払うと、結構シングルが出やすいと思います。

(無題) 削除/引用
No.1200-6 - 2008/05/28 (水) 10:36:35 - L
私がよくやるのは、
凍結された大腸菌のストックを2本の滅菌爪楊枝で掻き取って、
1 ml ぐらいの滅菌水とかLBとかSOB(Mgあり、無し、どちらでも)に溶かして、
適した培地に白金耳でストリークです。

グリセロールストックは菌数が多いので、そのままをストリークすると、
菌がうまく分散しなくて、シングルがとれないことがあるので。

(無題) 削除/引用
No.1200-5 - 2008/05/27 (火) 20:11:19 - AP
>溶かしてから少量まいていました

念のため。
蒔くといっても、グリセロールストックを起こすときは、
spreadするのではなく、白金耳(platinum loop)やディスポのinoculating needle を使って、streaking (画線培養)するのがふつうです。

(無題) 削除/引用
No.1200-4 - 2008/05/27 (火) 20:00:34 - AP
そういうやり方が一般的でしょう。実験書にも、あたりまえにそう書いてあると思いますが。

凍結、融解を繰り返すと細胞が壊れて、急激に生菌数が減少します。
タンパク質を精製するのために、大腸菌を破砕する方法の一つとして
凍結・融解を繰り返す方法もあるくらいですから。

また、一旦、融解してしまうと、菌が底の方に沈んできます。
そうすると、凍結したまま表層を掻き取っても、生えてこないことが起こりえます。結局、融かして底から取らないとだめで、さらに死に、沈殿する、、、と悪循環が起こります。

(無題) 削除/引用
No.1200-3 - 2008/05/27 (火) 19:37:42 - おお
あ、線虫についてはわかりません。

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No.1200-2 - 2008/05/27 (火) 19:34:47 - おお
大腸菌でしょうか、それともその他の酵母などの生物でしょうか?いずれにせよ両者とも凍ったまま滅菌された物でつつき、プレートなどにまく方が、ストックしている菌にストレスがかからず、長持ちします。

グリセロールストックについて 削除/引用
No.1200-1 - 2008/05/27 (火) 19:15:55 - 修行中
グリセロールストックを使用するときは凍ったまま、一部を削り取って用いるという記述を発見したのですが、本当ですか?こういうやりかたが一般的なんでしょうか?私はこれまで、溶かしてから少量まいていました。。。以外に他人がグリセロールストックを扱う場面なんて見かけないもんで、、皆さんはどうされてますか?
http://oshiete1.goo.ne.jp/qa2080160.html

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