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(無題) 削除/引用 No.1213-2 - 2008/05/29 (木) 01:25:38 - AP インサートに5'-Piがあるので、ベクターの3'-OHとligationされます。 ベクターの5'末端のPiは脱リン酸されて5'-OHになるので、インサートの3'-OHとはligationされずnickとしてのこり、open circular状態になります。しかし、nickは大腸菌内で修復されるので問題ありません。 脱リン酸せずligationしてclosed circularになったとしても、それだけで生理的な状態のプラスミド（ccc, super coiled）になるわけではなく、大腸菌内のtopoisomeraseなどの助けがあって完成するわけで、どのみちligation puroductはプラスミドとしては完全なものではありませんね。

ホスファターゼ処理後のライゲーションについて 削除/引用 No.1213-1 - 2008/05/29 (木) 00:35:06 - アヤカ 組み換えプラスミドをつくる際に、２種の制限酵素でベクターを切断し セルフライゲーションを回避するためにホスファターゼ処理すると良いと 聞きました。ホスファターゼ処理すると５´末端も３´末端もOHになりますが、ここに同じ制限酵素で切ったインサートとDNAリガーゼ液を入れるだけで ライゲーションは起こるのですか？ベクターの末端がすべてOHでもリガーゼは働くことができるのですか？５´末端がリン酸でないとリガーゼが働くことができないというわけではないですか？ かなり初歩的な質問ですが、ご解答お願いいたします…

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