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(無題) 削除/引用 No.1214-3 - 2008/05/29 (木) 06:10:38 - おお >IκBは燐酸化によりからはなれ、プロテアソームで分解されるとききます。 IκBは燐酸化によりNF-κBからはなれ、プロテアソームで分解されるとききます。 訂正しておきます。

(無題) 削除/引用 No.1214-2 - 2008/05/29 (木) 06:08:48 - おお 一つ疑問があるのですが両者(IκB,NF-κB)の燐酸化とNF-κBの活性化はどの程度反映しているのでしょうか? IκBは燐酸化によりからはなれ、プロテアソームで分解されるとききます。燐酸化が分解シグナルとなるので、燐酸化型の量がどの程度反映するか疑問です。でもこの辺は専門ではありませんので参考程度ということで、、、 �@については、細胞と同様のlysis bufferで十分抽出できるか、ちがうバッファーで、抗体の活性にあまり影響のないもので抽出できるなら、燐酸化、トータルのたんぱく質の検出は可能だと思います。ELISAウエスタンより遥かに定量せいに優れているのでデーターとしてはスッキリした結果が出る可能性がおおきいです。 �Aもin vivoからのサンプルの解析は可能かと思います。 >動物から採取した臓器をhomogenizeして核と細胞質を分離させて、細胞質だ >けを取り出して、それを上記の方法で検定するというのは不可能でしょう >か？ 核と細胞質を分離ができるなら、核にある(核に移行した)NF-κBを検出すると活性という面でIκBの状態を検出するよりは直接的なのではないでしょうか?

NF-κBの活性分析 削除/引用 No.1214-1 - 2008/05/29 (木) 03:38:49 - ma1230 私は細胞質内におけるIκBαのリン酸化の有無を解析することで、NF-κBの活性状態を分析したいと考えているものです。 　この分析をするために考えていることは �@特定のタンパク質のtotalと活性型の相対量をELISAで測定 　（CASE™: Cellular Activation of Signaling ELISAキット使用予定） �AIκBαとphosphate-IκBαをwestern blotで解析する の2種類を考えているのですが、どちらもin vitro（培養細胞利用）での話ですが、in vivoでの分析はできないでしょうか？たとえば、動物から採取した臓器をhomogenizeして核と細胞質を分離させて、細胞質だけを取り出して、それを上記の方法で検定するというのは不可能でしょうか？

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