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(無題) 削除/引用 No.1745-5 - 2008/08/15 (金) 11:15:57 - うんと いえ、空胞化はクロロキンによるものだとは承知です。 質問はDMSO shockの時間です。

(無題) 削除/引用 No.1745-4 - 2008/08/15 (金) 10:52:54 - 年寄 空胞化はクロロキンのせいでは？

(無題) 削除/引用 No.1745-3 - 2008/08/14 (木) 22:54:04 - うんと transplantさん ありがとうございます。 結局、間を取って5分でやりましたが、それで約５割ほど入ってくれましたのでよかったです。 細胞は少し接着が弱くなってるかなー？という気がしましたがその後の培養は問題ありませんでした。 というのも、昔友人からDMSO単独でもJNK（stress activated protein kinase）のリン酸化が誘導されるらしく、細胞に毒性結構あるのでは？と思った次第で質問させていただきました。 ありがとうございます。

的外れだとスイマセン。 削除/引用 No.1745-2 - 2008/08/14 (木) 22:47:03 - transplant DMSO10％って、（細胞によるとは思いますが）結構大丈夫みたいですよ。 細胞をフリーズストックする液体（セルバンカーとか。こいつに入ってるかは定かではありませんが）に入ってることがあるようです。 また先日、拾ってきたプロトコルで細胞保存液を自作したのですが「DMSOは凍害防御剤として作用する」、「その濃度は1-50％（ｖ/ｖ）である」とあったので、10％くらいだと、案外大丈夫なのかなと。ちなみにこのときは20％で作りました。

DEAE-dextran法を用いた遺伝子導入について 削除/引用 No.1745-1 - 2008/08/08 (金) 22:16:37 - うんと Current protocol of molecular biologyに沿って、DEAE-dextran法を初めて試しました。 いつもはlopofectamine 2000を用いていたのですが、マウス繊維芽細胞L cellにおいてはlipofectionによる毒性が激しく死滅してしまいます。 そこでDEAE-dextran法を用いることにしました。 50-75 %の細胞占有率のdishに対して、2.5 % FBS、100uMクロロキン、100ug/ml DEAE-dextran、DNA 1ug/mlで４時間、３７℃で反応させました。 細胞内にvacuolesが沢山観察されました。 上清を除いて、10 % DMSO in PBSにて、DMSO shockを5 min行いました。 みなさん、このような条件で行っていますか？ L細胞はDEAE-dextra法で遺伝子導入しやすいと小生の所属するlabでそういい伝えられてきました。 今回、初めてですので、これでいけるかなあと思っていますが。 DMSO shockってのが正直toxicityあるのでは？１０％でしょ？？！！って感じで不安です。。

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