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微量サンプルからのRNA抽出 トピック削除
No.1295-TOPIC - 2008/06/09 (月) 21:36:58 - ゴブリン
結構困っているので、よろしくお願いします。

今、RNAlater(QIAGEN)中にある微量組織サンプルからRNAの抽出を
試みています。どの位微量かというと一辺が0.5mmの立方体位の大
きさでRNAlater20μℓ中で完全に浸っている位の組織量です。

そこからRNeasy mini Kit(QIAGEN)を使ってRNA抽出を試みたのです
が、濃度が薄いために逆転写をしてReal-timePCRをするのが難しい
状況です。

そこでRNAlater20μℓ中の微量組織サンプルから割と高濃度でRNA抽出
できる方法や何かキットなどで知っている方がおりましたら教えて頂
けないでしょうか。

ちょっとしたことでもいいので、よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.1295-6 - 2008/06/11 (水) 11:29:04 - T-2
キアゲンのRNeasy Micro Kit または
RNeasy Plus Micro Kitはどうでしょう。
細胞ですが、24ウェルからきれいにとれましたよ。

(無題) 削除/引用
No.1295-5 - 2008/06/11 (水) 11:03:19 - とおりすがり
どうしても量がかせげないようでしたら、
PCRで少し増幅→リアルタイムPCRという手もあるようですよ。

http://www.ambion.com/jp/techlib/tn/144/9.html

(無題) 削除/引用
No.1295-4 - 2008/06/10 (火) 12:31:27 - ゴブリン
迅速な回答ありがとうございました。

キャリアーの検討してみたいと思います。あとはやはりロスをどれだけ
防げるかですよね。

いろいろ検討しながらやってみたいと思います。

(無題) 削除/引用
No.1295-3 - 2008/06/09 (月) 23:59:43 - AP
一般論ですが、微量のRNAの抽出では、カラムにしろTrizolにしろRNA量に対して容量が大きくなるので、どうしても避けられない吸着や有機層への分配によるロスでほとんどを失ってしまうことがあります。これを避けるには、homogenaizeの段階から大過剰のキャリアRNA(tRNAやpolyI-Cなど)を加えてRNA抽出操作をすると良いと思います。

微量サンプルからのRNA抽出 削除/引用
No.1295-1 - 2008/06/09 (月) 21:36:58 - ゴブリン
結構困っているので、よろしくお願いします。

今、RNAlater(QIAGEN)中にある微量組織サンプルからRNAの抽出を
試みています。どの位微量かというと一辺が0.5mmの立方体位の大
きさでRNAlater20μℓ中で完全に浸っている位の組織量です。

そこからRNeasy mini Kit(QIAGEN)を使ってRNA抽出を試みたのです
が、濃度が薄いために逆転写をしてReal-timePCRをするのが難しい
状況です。

そこでRNAlater20μℓ中の微量組織サンプルから割と高濃度でRNA抽出
できる方法や何かキットなどで知っている方がおりましたら教えて頂
けないでしょうか。

ちょっとしたことでもいいので、よろしくお願いします。

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