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PCRについて トピック削除
No.2769-TOPIC - 2009/01/31 (土) 07:10:19 - 初心者
初心者です。どなたか教えていただけませんか。

PCRでネガティブコントロールの水にもポジティブバンドが出てしまうのですが、コンタミ以外に、何か理由は考えられるのでしょうか?30−35サイクルではポジコンよりは薄いのですが。
 
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No.2769-6 - 2009/02/01 (日) 02:54:53 - 初心者
ありがとうございます。
ピペットマンの可能性ですか。素人なもので、考えていませんでした。試薬は全部変えたのに、おかしいなあ、と悩んでいました。

まずは、ピペットマンチェックしてみます。
ありがとうございました。

追加 削除/引用
No.2769-5 - 2009/01/31 (土) 14:05:46 - 22
あ、でもそっか。
ピッペトマンが汚染している可能性があるとすると
それを共通試薬に突っ込むのは、、、

注意した方が良いかも。

(無題) 削除/引用
No.2769-4 - 2009/01/31 (土) 13:56:45 - 22
ネガコンの水とはなんのネガコンでしょうか?
普通に考えればDNA(template)でしょうけど。

加えるもの全てに対して「水」のコントロールを、
御自分のピペットマンを使う、
別のピペットマンを使う、
でやれば何かわかるかもしれませんね。

まぁやはり本命はピペットマンのコンタミでしょうね。
そもそもその「水」かもしれませんが。

でももしかしたら共通試薬かもしれませんし。


組み合わせとしては10?位でしょうか?
ちょっと面倒ですが頑張って下さい。

(無題) 削除/引用
No.2769-3 - 2009/01/31 (土) 09:57:46 - 免疫屋
コンタミの可能性を除外できる理由(根拠)があるのですか?

~さんの指摘されたピペットマンに加えて,水,酵素,バッファー,プライマーすべてを新しくしたうえでのご相談でしょうか?

(無題) 削除/引用
No.2769-2 - 2009/01/31 (土) 07:45:31 - ~
ピペットがすでに汚染されていて、
フィルター付きチップで操作したら出なくなったことがあります。

サイズによっては、プライマーダイマーかもしれません。

PCRについて 削除/引用
No.2769-1 - 2009/01/31 (土) 07:10:19 - 初心者
初心者です。どなたか教えていただけませんか。

PCRでネガティブコントロールの水にもポジティブバンドが出てしまうのですが、コンタミ以外に、何か理由は考えられるのでしょうか?30−35サイクルではポジコンよりは薄いのですが。

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