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WST-8の結果が細胞の見た目と相関しない トピック削除
No.2771-TOPIC - 2009/01/31 (土) 22:43:30 - KT
細胞増殖アッセイキットのWST-8を使い、酵素阻害剤の細胞死への影響を調べています。阻害剤添加後明らかな細胞形態変化(変性)が認められ、細胞死が起こっている(起こっている途中)と判断しWSTにより評価しました。その結果、予想に反して阻害剤添加群の方が吸光度が明らかに高くなってしまいました。WST-8を分解する酵素が何らかの形で誘導されてこのような結果になったとは思いますが、少し納得できません。
みなさんこのような経験はありますでしょうか?そのような方がいらっしゃたらなにかアドバイスいただければありがたいです。
 
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No.2771-5 - 2011/01/06 (木) 09:33:33 - KimiBob
皆様ごご指摘のように反応原理に立ち返り,当該阻害剤の酸化還元反応への影響の観点から考えるといいと思います。

(無題) 削除/引用
No.2771-4 - 2009/02/03 (火) 12:38:31 - おお
>[Re:3] ajiさんは書きました :
> ホルマザンはsuperoxide anionと反応性が高いのはご存知でしょうか。
> ご参照下さい。
> http://www.dojindo.com/newsletter/review_vol3-3.html
>
> もし、お使いの薬剤がROS産生を誘導し、細胞の形態変化が細胞膜破壊を伴っていたら、WST-8がより反応しても不思議ではありません。活性酸素測定も併用されてみては如何でしょうか。

私もそう思います。

(無題) 削除/引用
No.2771-3 - 2009/02/03 (火) 12:17:17 - aji
ホルマザンはsuperoxide anionと反応性が高いのはご存知でしょうか。
ご参照下さい。
http://www.dojindo.com/newsletter/review_vol3-3.html

もし、お使いの薬剤がROS産生を誘導し、細胞の形態変化が細胞膜破壊を伴っていたら、WST-8がより反応しても不思議ではありません。活性酸素測定も併用されてみては如何でしょうか。

(無題) 削除/引用
No.2771-2 - 2009/02/01 (日) 05:16:42 - おお
この手のキットは、細胞ないの酵素活性を
測っているので細胞の数と相関しない場合は
十分考えられます。
ですので、今回は適さなかったと言う事で
違う方法を取られた方がいいのではないか
とおもいます。
それと、一度は生細胞数を実際にカウント
することをおすすめします。
数と、試薬の発色に相関があるか(あなたの実験で細胞に加える
サンプルが存在する状態で)、確かめてから
使わないと試薬から得られる数字は当てにならない
という意識は持っていてほしいと思います。

細胞が明らかに死んでいる状態で、フォルマザンの
形成でうまくはかれないなら乳酸脱水素酵素(LDH)
の放出を見た方がベターかもしれません。
http://www.promega.co.jp/jp/prometec_J/pdf/pj8/PJ-No8-p03.pdf
生細胞をはかるのでなく死細胞が放出する酵素
を測るという点で、若干データーの意味合いが
違ってきますが、、、

WST-8の結果が細胞の見た目と相関しない 削除/引用
No.2771-1 - 2009/01/31 (土) 22:43:30 - KT
細胞増殖アッセイキットのWST-8を使い、酵素阻害剤の細胞死への影響を調べています。阻害剤添加後明らかな細胞形態変化(変性)が認められ、細胞死が起こっている(起こっている途中)と判断しWSTにより評価しました。その結果、予想に反して阻害剤添加群の方が吸光度が明らかに高くなってしまいました。WST-8を分解する酵素が何らかの形で誘導されてこのような結果になったとは思いますが、少し納得できません。
みなさんこのような経験はありますでしょうか?そのような方がいらっしゃたらなにかアドバイスいただければありがたいです。

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