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ブラックライトを用いたGFP観察 トピック削除
No.2805-TOPIC - 2009/02/05 (木) 10:20:23 - gfp
GFPをはじめて扱う者です。

現在、Renilla mulleri GFP(以下、RmGFP)を組込んだベクターを酵母へ形質転換し、ブラックライトを用いてGFPの蛍光観察しようと考えています。

RmGFPの励起波長:485 nm
ブラックライト:352 nm

これだけ違いがあっても蛍光観察できるのでしょうか?
どうか教えて下さい。



行った手順
1.pRmGFPからPCRでGFP遺伝子を単離
2.当研究室で構築したベクターへ組み込み
3.酵母へ形質転換
4.ブラックライトで観察できるか実験中

pRmGFP 参照URL
http://www.luxbiotech.com/Docs/Nanolight/Renilla_GFP.pdf
 
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(無題) 削除/引用
No.2805-5 - 2009/02/06 (金) 00:13:44 - AP
参考リンクにあるように、その辺の波長は全く吸収しませんね。青色蛍光灯でも使ったほうがまだ見込みがあるかも。

値段もデザインもいろいろ出ているので、手頃な青色LEDイルミネーターを購入するのがベストじゃないでしょうか。DNAにダメージを与えずにゲルから切り出すのにも流用できるし(十分なDNA量があればEtBr染色でも見えます)、投資としては悪くないと思います。

ttp://www.ru-koueki.co.jp/51/1716.html
ttp://www.ikedarika.co.jp/general_catalog/A/01/10/I003A0110170.html

(無題) 削除/引用
No.2805-4 - 2009/02/05 (木) 15:05:25 - おお
>[Re:3] あかねさんは書きました :
> 経験あります。
> 酵母でなないですが、大腸菌でGFP融合蛋白質を発現させました。
> 研究室によくあるブラックライトを当てると、
> 精製した蛋白質はもちろん、大腸菌のコロニーも緑に光りました。

Renilla mulleri GFP(RmGFP)をお使いになって光ったということでしょか。
そうであればピークの波長ではこのRmGFPはレイキしなさそうなので、
ブラックライトのひかりがピークから外れたところ
でもかなり強いということかもしれませんね。
青よりの光も可也出ているのでしょうね。
実際若干色が見えますし。

(無題) 削除/引用
No.2805-3 - 2009/02/05 (木) 14:40:52 - あかね
経験あります。
酵母でなないですが、大腸菌でGFP融合蛋白質を発現させました。
研究室によくあるブラックライトを当てると、
精製した蛋白質はもちろん、大腸菌のコロニーも緑に光りました。
発現量にもよると思いますが、光らせることは可能です。
どういう実験にしようされるのか分かりませんが、
スクリーニング程度ならできますよ。

(無題) 削除/引用
No.2805-2 - 2009/02/05 (木) 12:50:11 - おお
Aequorea GFPか、その変異体BFPを使った方がいいんでない?
ブラックライトの波長ピークでそのGFPは
吸収がないので、蛍光も出ないと思いますが。

ブラックライトを用いたGFP観察 削除/引用
No.2805-1 - 2009/02/05 (木) 10:20:23 - gfp
GFPをはじめて扱う者です。

現在、Renilla mulleri GFP(以下、RmGFP)を組込んだベクターを酵母へ形質転換し、ブラックライトを用いてGFPの蛍光観察しようと考えています。

RmGFPの励起波長:485 nm
ブラックライト:352 nm

これだけ違いがあっても蛍光観察できるのでしょうか?
どうか教えて下さい。



行った手順
1.pRmGFPからPCRでGFP遺伝子を単離
2.当研究室で構築したベクターへ組み込み
3.酵母へ形質転換
4.ブラックライトで観察できるか実験中

pRmGFP 参照URL
http://www.luxbiotech.com/Docs/Nanolight/Renilla_GFP.pdf

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