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(無題) 削除/引用 No.1021-4 - 2011/10/07 (金) 15:07:01 - bluehornet 抽出やPCRの際の系のサイズはどの程度ですか？ 「１〜数細胞からDNAを抽出」ということなので、抽出したサンプルをほぼ全量用いてPCRすることになると思います。 DEXPATで抽出したサンプルの持ち込み量は１/10量までなので、PCRを100uLの系にしたとしてDEXPAT抽出後のサンプルは10uL必要となります。DEXPATでの抽出操作は100℃で10分の加熱や、パラフィン薄膜やDEXPAT中に含まれる樹脂を除くためのサンプルの分取などがありますよね。個人的にはなかなか操作が厳しいのではないかと感じます。 1チューブでPCRまで持って行ける方法を検討した方がいいのではないかと思います。 僕自身、以前にDEXPATを使ったことがあったんですが、DNAの抽出効率の悪さに他の方法に変更した経緯があります。ただし、パラフィン切片を数枚使ったりするような説明書通りのスケールですが。

(無題) 削除/引用 No.1021-3 - 2011/10/06 (木) 21:39:32 - AA LMDではなく、酵素でバラバラにした組織から1細胞を取ってきてRT-PCRをしていたことがあります。 その場合はnestedPCRにしないと安定してかかりませんでした。 DNA抽出とは違いますがご参考までに。。。

ハコモノ 削除/引用 No.1021-2 - 2011/10/06 (木) 20:26:10 - oooo それに対応したＰＣＲ装置が、ベックOンOOOOOとOOOOテクノクラスタから販売されてます。(AmpliSpeed slide cycler) 高いかな。

レーザーマイクロダイセクションした細胞からのPCR 削除/引用 No.1021-1 - 2011/10/06 (木) 15:22:46 - pcr お世話になっております。 パラフィン切片から、レーザーマイクロダイセクションした１〜数細胞からDNAを抽出し、PCRを行っていますが、安定しません。狙ったターゲットによってゃかかったりかからなかったりで、ものによっては全くかかりません。 PCRは、普通の大量に取れるDNA(血液とか)ではきちんとかかるので、プライマーがおかしいとかはないと思います。おそらく、抽出時にどこかでロスをしているのかなと思っていますが、回りに同じようなことを行っている人がおらず、実際的な問題でつまづいているかもしれません。 TaKaRaのDEXPATという試薬を使っています。 よろしくお願いします。

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