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バクテリアの特定遺伝子欠損法 トピック削除
No.104-TOPIC - 2011/03/03 (木) 20:14:11 - きのぴお
いつも勉強させて頂いております。

バクテリアに関しては、まったくの素人であるため、専門家の方々にご意見頂きたく、トピックを作成させて頂きました。

実験には、グラム陰性菌を用いております。
ただし、メジャーな菌ではありません。

この菌の特定の遺伝子を欠損させる簡便な方法はありますでしょうか。

そもそも、バクテリアの種類が変わるだけで、難易度がグッとあがるのでしょうか。

相同組み換え法を検討した結果、大腸菌ではうまくいったのですが、目的のバクテリアでは駄目でした。

大変初歩的な質問で申し訳ありませんが、宜しくご教授の程、御願い申し上げます。
 
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(無題) 削除/引用
No.104-5 - 2011/03/04 (金) 18:53:02 - きのぴお
Actias 様

ご返答頂き、有難うございます。
残念ながら、今のところ、GFPも含めて特定のノックインしたという論文はないようです。

(無題) 削除/引用
No.104-4 - 2011/03/04 (金) 13:26:42 - Actias
ポジコンになるものがあればいいですね。

その生物でGFPをノックインしたとか無いですか?

(無題) 削除/引用
No.104-3 - 2011/03/04 (金) 09:32:38 - きのぴお
Actias様

早速、お返事頂き有難うございます。
御紹介頂いたPNASの論文と同じベクターを用いて、recombinationさせたのですが、まったくコロニーが得られませんでした。

やはり、菌種が変わるだけで難易度があがるのでしょうか。

引き続き、ご返答頂けますと、有難く存じます。

(無題) 削除/引用
No.104-2 - 2011/03/03 (木) 21:50:12 - Actias
欠損株作成なら
dna.brc.riken.jp/lab/dna/en/thermus_3en.html
www.shigen.nig.ac.jp/ecoli/strain/top/top.jsp
www.shigen.nig.ac.jp/bsub/index.jsp

あと、
Genome-minimized Streptomyces host for the heterologous expression of secondary metabolism.
www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=20133795

バクテリアの特定遺伝子欠損法 削除/引用
No.104-1 - 2011/03/03 (木) 20:14:11 - きのぴお
いつも勉強させて頂いております。

バクテリアに関しては、まったくの素人であるため、専門家の方々にご意見頂きたく、トピックを作成させて頂きました。

実験には、グラム陰性菌を用いております。
ただし、メジャーな菌ではありません。

この菌の特定の遺伝子を欠損させる簡便な方法はありますでしょうか。

そもそも、バクテリアの種類が変わるだけで、難易度がグッとあがるのでしょうか。

相同組み換え法を検討した結果、大腸菌ではうまくいったのですが、目的のバクテリアでは駄目でした。

大変初歩的な質問で申し訳ありませんが、宜しくご教授の程、御願い申し上げます。

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