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LoxP配列入りのベクター トピック削除
No.1195-TOPIC - 2011/11/09 (水) 16:46:48 - GE
実験の都合上、まず、目的遺伝子を持つプラスミドをゲノム上に挿入し安定発現させ、次に、ある時期に、安定発現させていた遺伝子を取り除きたいと考えております。

遺伝子発現のON・OFFだと、Tetシステムがあるのですが、手間と発現リークの問題から、Cre-Loxシステムによる遺伝子の除去を考えております。

よくあるターゲティングベクターだと、薬剤耐性遺伝子がLoxPサイトで挟まれています。今回の場合、薬剤耐性遺伝子の代わりに目的遺伝子を入れておけば、Creの発現とともに、目的遺伝子を取り除けると思います。

そこで、LoxPサイトで挟まれた領域に目的遺伝子をクローニングできるベクター(市販)をご存じないでしょうか?
あるいは、市販のターゲティングベクターの薬剤耐性遺伝子を目的遺伝子に変えるしかないのでしょうか。
 
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(無題) 削除/引用
No.1195-5 - 2011/11/11 (金) 09:11:56 - GE
Harmoniaさま
こういうのを探しておりました!
入手を検討してみます。ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.1195-4 - 2011/11/10 (木) 21:12:24 - Harmonia
これ?
http://dna.brc.riken.jp/search/gif/RDB1679.gif

http://dna.brc.riken.jp/en/resource290en.html
にある。

(無題) 削除/引用
No.1195-3 - 2011/11/10 (木) 09:57:38 - GE
TK-1さま
やはりそれが一番手っ取り早いのでしょうか。


あと、思ったのですが、
<LoxP-目的遺伝子-LoxP>をゲノム上にランダムに数個組み込んだ場合、一つの<LoxP-目的遺伝子-LoxP>内の左右LoxPでの反応以外にも、ゲノム上に挿入されたすべての<LoxP-目的遺伝子-LoxP>のLoxP間での反応も考えられるのですが、こういった例を示した論文をご存知の方おられますでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.1195-2 - 2011/11/09 (水) 19:08:45 - TK-1
PCR Primerに付ける。

LoxP配列入りのベクター 削除/引用
No.1195-1 - 2011/11/09 (水) 16:46:48 - GE
実験の都合上、まず、目的遺伝子を持つプラスミドをゲノム上に挿入し安定発現させ、次に、ある時期に、安定発現させていた遺伝子を取り除きたいと考えております。

遺伝子発現のON・OFFだと、Tetシステムがあるのですが、手間と発現リークの問題から、Cre-Loxシステムによる遺伝子の除去を考えております。

よくあるターゲティングベクターだと、薬剤耐性遺伝子がLoxPサイトで挟まれています。今回の場合、薬剤耐性遺伝子の代わりに目的遺伝子を入れておけば、Creの発現とともに、目的遺伝子を取り除けると思います。

そこで、LoxPサイトで挟まれた領域に目的遺伝子をクローニングできるベクター(市販)をご存じないでしょうか?
あるいは、市販のターゲティングベクターの薬剤耐性遺伝子を目的遺伝子に変えるしかないのでしょうか。

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