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(無題) 削除/引用 No.12-4 - 2011/02/14 (月) 00:47:00 - Boston-Pullman 脂質の気がします。 組織細胞とは培養細胞株ではなく、組織の一部のことですよね？

(無題) 削除/引用 No.12-3 - 2011/02/13 (日) 22:52:59 - TS >現在細胞からタンパク質を抽出、精製しウェスタンブロットにて解析したところ、バンドがスメア状になっています。 もう少し情報があれば、すぐに解決しそうな内容です。もう少し情報を書いた方が良いと思います。 とりあえず、状況からはSDS-PAGEの問題なのではないかと。かなりの初心者さんのようですので、引っかかりそうなところしては、 １．タンパク量が多いのでは？ ２．ゲノムが断裂せずに残っているのでは？ ３．精製。。。してるの?

(無題) 削除/引用 No.12-2 - 2011/02/13 (日) 22:50:57 - AP ゲノムDNAの処理は何かしていますか？ ゲノムDNAは粘性が高く高分子で、ゲルマトリックスをつまらせますので、タンパク質の移動を妨げて、スメアにしやすいです。ソニケーションや注射針のなかを往復させるなど、DNAをせん断化する操作が有効です。 スメアになっているのをブロッキングや抗体をどうこうしても関係ないとおもいますけれど。

組織細胞からのタンパク質抽出 削除/引用 No.12-1 - 2011/02/13 (日) 22:40:54 - sk 初めまして 現在細胞からタンパク質を抽出、精製しウェスタンブロットにて解析したところ、バンドがスメア状になっています。 抗体やブロッキング剤などの様々な検討をしたのですが、毎回同じ結果です。 タンパク質精製時に何かしらの余計な物が付いてきていると思われます。 これをさらに解析したいのですが、何か良い実験方法や解析方法はありませんでしょうか？ 当方細胞関係の操作がまったくの未経験なので、ご指導、ご教授いただければ幸いです。 よろしくお願いします。

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