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(無題) 削除/引用 No.1314-2 - 2011/12/09 (金) 19:18:18 - み mature neuronは入りにくい（または入らない？）というのが一般的な認識だと思います。ですから普通は培養開始初期の段階で導入しておいて、長期培養し、観察します。 その方法でプラスミドの抜け落ちや、発現不足はないはずです（分裂しないので保持されやすいのか、3,4週間後でもoverexpressしています）。 勿論、発現させる蛋白が細胞生存に悪影響を及ぼすものは不適用かもしれませんが。 mature neuronへの導入にこだわるならウイルスベクターですかね。 これは僕は試したことないのでアドバイスできませんが、論文多数出ていると思います。

神経細胞への遺伝子導入 削除/引用 No.1314-1 - 2011/12/09 (金) 18:16:39 - りんちょろ マウス由来のprimary hippocampal neuronにGFPを導入してDIV21で固定、検鏡を行いたいと考えています。 試薬はlipofectamine 2000を用いており、DIV0〜10までの培養初期には導入できるのですがスパインの観測ができるDIV17あたりになってくると全く入りません。1wellあたりDNA量は600〜800ng,試薬は1μLで検討しています。濃度を薄くすると入らず、濃くすると細胞が浮いてきてしまいます。 primary neuronということであまり頻回にメディウムチェンジはしたくなく、培養期間が長いため抗生物質を添加した条件で行っているのですが、やはりこの点を推奨プロトコル通りにするべきなのでしょうか。DIV3〜10ではメディウムチェンジの有無、抗生剤の有無によらずおよそ同程度の効率です。メディウムを半量だけ変えるなど何か工夫などありましたら教えていただけないでしょうか。 また、細胞増殖がないためDIV10前後に導入したGFPがDIV21でも見れるのではないかとも考えているのですが、そのようなことは可能なのでしょうか。 よろしくお願いします。

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