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IF:組織中の赤血球について トピック削除
No.1334-TOPIC - 2011/12/13 (火) 17:05:19 - にょん
いつもお世話になっております。

免疫蛍光染色(IF)についての質問です。
現在マウス組織を用いてIFを行っているのですが、シグナルを確認しようとFITC用・ローダミン用フィルターで観察すると、血管内・組織中に漏出した赤血球がどちらのフィルターにおいてもぴかぴかに光ってしまっていて、陽性シグナルを判別することが出来ずに困っています。
組織は4%PFA固定パラフィン切片、OCTコンパウンド包埋凍結切片を使用しています。
使用している抗体は赤血球を染色しません。(解剖の際に潅流固定を行えばよかったのですが、施設・スタッフ等の都合により実施することが出来ませんでした。)
また、赤血球以外のバックは検鏡に問題ない程度の発色でした。
DAB発色ではポジティブシグナルをきっちり確認出来ている抗体で、ゆくゆくはマルチカラーでIFを行いたいと考えているのですが・・・。
そこで質問です。
固定・包埋済みの検体において、赤血球の蛍光発色を抑える方法はあるのでしょうか。
御指導の程、よろしくお願い致します。

追伸
プロトコールは下記URLで公開して頂いているものを参考にしております。
http://www.cstj.co.jp/support/protocols/IF.php
 
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(無題) 削除/引用
No.1334-2 - 2011/12/15 (木) 05:02:02 - rbc
No.1329-2でAPさんが示してくれているリンクに答えがあります

IF:組織中の赤血球について 削除/引用
No.1334-1 - 2011/12/13 (火) 17:05:19 - にょん
いつもお世話になっております。

免疫蛍光染色(IF)についての質問です。
現在マウス組織を用いてIFを行っているのですが、シグナルを確認しようとFITC用・ローダミン用フィルターで観察すると、血管内・組織中に漏出した赤血球がどちらのフィルターにおいてもぴかぴかに光ってしまっていて、陽性シグナルを判別することが出来ずに困っています。
組織は4%PFA固定パラフィン切片、OCTコンパウンド包埋凍結切片を使用しています。
使用している抗体は赤血球を染色しません。(解剖の際に潅流固定を行えばよかったのですが、施設・スタッフ等の都合により実施することが出来ませんでした。)
また、赤血球以外のバックは検鏡に問題ない程度の発色でした。
DAB発色ではポジティブシグナルをきっちり確認出来ている抗体で、ゆくゆくはマルチカラーでIFを行いたいと考えているのですが・・・。
そこで質問です。
固定・包埋済みの検体において、赤血球の蛍光発色を抑える方法はあるのでしょうか。
御指導の程、よろしくお願い致します。

追伸
プロトコールは下記URLで公開して頂いているものを参考にしております。
http://www.cstj.co.jp/support/protocols/IF.php

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