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SoluBL21を使ったタンパク質誘導 トピック削除
No.1366-TOPIC - 2011/12/21 (水) 23:17:41 - M9
不要化しやすいタンパク質のリコンビナントを得ようと実験を続けております。GenlantisのSoluBL21というコンピテントセルがあることをこちらの掲示板で知り、購入いたしました。
目的のコンストラクトを組み込むところまでは問題なく進んでいるのですが、添付プロトコール通りにM9 mediaで培養しようとすると全く増殖しません。
グリセロールストックの一部をM9 mediaに接種して室温で培養を開始しているのですが、凍結保存菌体からの場合、LBなどの培地で37度で一度回復培養が必要なのでしょうか？
SoluBL21をご使用の方、またはM9 mediaを使ってタンパク質誘導をされた経験のある方、ご助言よろしくお願いします。
　
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Trace Salt Solution 削除/引用
No.1366-6 - 2011/12/24 (土) 15:51:16 - mon
大腸菌の無機培地で使っている微量元素溶液の処方に以下のような例があります。
1000x Trace Salt Solution by F.W.Studier
Protein Expression and Purification, 41:207‒234 (2005)
50mM FeCl3, 20mM CaCl2, 10mM MnCl2, 10mM ZnSO4, 2mM CoCl2, 2mM CuCl2, 2mM NiCl2, 2mM Na2MoO4, 2mM Na2SeO3, 2mM H2BO3

(無題) 削除/引用
No.1366-5 - 2011/12/22 (木) 20:23:28 - 印象派
私も、微量な元素が生育に必要であるというのを聞いたことがあります。よって、超純水はトラブルになることがあるそうです。

(無題) 削除/引用
No.1366-4 - 2011/12/22 (木) 18:18:46 - K20A
私のラボでも全く同じ現象がありました。
確か、Ｆｅを加えると発現はしました。
最少培地に何かを加えるっていうのは、そのラボのノウハウらしいです。


ちなみに私どもは不溶性タンパク質が可溶化することはありませんでした。

(無題) 削除/引用
No.1366-3 - 2011/12/21 (水) 23:58:43 - もくもくさん
グリセロールストックから起こす場合、抗生物質入り寒天培地で一度培養してシングルコロニーを得てから液体培地に植菌するのが基本です。
いきなり液体培地に植えても、なかなか生えないですよ。特にM9の場合。
LBだとleakyな発現が出ると思います。目的タンパク質が菌の生育に影響を与えないのなら、コロニーを拾ってからの前培養にLBを使うのは有りだと思います。

(無題) 削除/引用
No.1366-2 - 2011/12/21 (水) 23:21:48 - M9
すいません、不要化ではなく不溶化の間違いです。

SoluBL21を使ったタンパク質誘導 削除/引用
No.1366-1 - 2011/12/21 (水) 23:17:41 - M9
不要化しやすいタンパク質のリコンビナントを得ようと実験を続けております。GenlantisのSoluBL21というコンピテントセルがあることをこちらの掲示板で知り、購入いたしました。
目的のコンストラクトを組み込むところまでは問題なく進んでいるのですが、添付プロトコール通りにM9 mediaで培養しようとすると全く増殖しません。
グリセロールストックの一部をM9 mediaに接種して室温で培養を開始しているのですが、凍結保存菌体からの場合、LBなどの培地で37度で一度回復培養が必要なのでしょうか？
SoluBL21をご使用の方、またはM9 mediaを使ってタンパク質誘導をされた経験のある方、ご助言よろしくお願いします。
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