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ペプチドとMHC親和性の検討について トピック削除
No.1384-TOPIC - 2011/12/28 (水) 11:08:28 - 67

お世話になっています。マウスMHC class Iに野生型よりも強く結合するとコンピュータで予想される改変ペプチドを使用して、実際の細胞での検討を実施しようとしています。検索していく中で以下の論文を見つけたのですが、これで差を見出すことができるのか疑問に思い、投稿しました。


Peptide binding to H-2Kb and H-2Db was determined as follows. RMA-S cells, precultured at 26°C for 48 h, were washed three times in serum-free media and incubated with peptide at 26°C for 2 h, followed by 2 h at 37°C. Cells were washed with ice-cold PBS/0.5% BSA, stained for expression of H-2Kb and H-2Db, and analyzed on a FACScan™.

MHC class Iの発現は、親和性の強いペプチドが結合すると発現量が上昇するのでしょうか?

よろしくお願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.1384-3 - 2011/12/28 (水) 17:25:58 - 67
ai様

コメント有難うございました。
RMA-Sは変異株だったのですね。先ほど調べて納得しました。

ただ、現在検討しようとしているペプチドはBalb/c由来なので、
Balb/cでもそういった変異株があるか調べてみます。

(無題) 削除/引用
No.1384-2 - 2011/12/28 (水) 13:01:58 - ai
MHCの発現が上昇するというよりは、affinityの強いpeptideが結合すると膜表面により長くretentionするというか安定化するというかそういう解釈だったと思いますよ。

教科書的にはpeptideが乗っていないMHCは不安定ですぐにendoytosisされると書かれてあります。このRMA-S細胞はTAPにmutationが入ってるので、この細胞のMHCにはpeptideが乗っていないので膜表面のMHCは不安定です。

ですので、外部からpeptideをpulseすることでaffinityが高いものを選ぶ、ということをこの細胞を使ってよくしますよ。

ペプチドとMHC親和性の検討について 削除/引用
No.1384-1 - 2011/12/28 (水) 11:08:28 - 67

お世話になっています。マウスMHC class Iに野生型よりも強く結合するとコンピュータで予想される改変ペプチドを使用して、実際の細胞での検討を実施しようとしています。検索していく中で以下の論文を見つけたのですが、これで差を見出すことができるのか疑問に思い、投稿しました。


Peptide binding to H-2Kb and H-2Db was determined as follows. RMA-S cells, precultured at 26°C for 48 h, were washed three times in serum-free media and incubated with peptide at 26°C for 2 h, followed by 2 h at 37°C. Cells were washed with ice-cold PBS/0.5% BSA, stained for expression of H-2Kb and H-2Db, and analyzed on a FACScan™.

MHC class Iの発現は、親和性の強いペプチドが結合すると発現量が上昇するのでしょうか?

よろしくお願い致します。

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