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教えてくださいオリゴアダプター作成方法 トピック削除
No.1433-TOPIC - 2012/08/21 (火) 23:09:06 - ringo1230
34merくらいのオリゴアダプターを作りたいと思っています。
具体的な作成方法がわからないのですが以下の方法でできますでしょうか?
アニールできる配列のオリゴをTEで同じ濃度(50nM)になるように溶いてそれぞれ5ul入れてPCR装置で95℃15minそのあと電源きればOKですか?
少ない量でつくりたいのですがtotal10ulでも蒸発しなければ可能でしょうか?
知識がないのでよろしくお願いします。

もしアダプター作成方法が記載されている本等をご存知でしたら教えてください。
 
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No.1433-6 - 2012/10/23 (火) 21:02:17 - 伊藤+静子
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No.1433-5 - 2012/08/27 (月) 22:33:39 - ringo1230

(無題) 削除/引用
No.1433-4 - 2012/08/24 (金) 11:22:03 - ringo1230
ご意見ありがとうございます!
論文のようにゆっくり冷やして作成します。
塩も入れてbufferを作成してみます。

(無題) 削除/引用
No.1433-3 - 2012/08/23 (木) 14:56:53 - ~
>具体的な作成方法がわからないのですが以下の方法でできますでしょうか?
"当たり"のフラグメントはチューブ中にできるでしょう。
精製等が必要になるかは目的次第ですが。

>OKですか?
PCR装置のブロックの比熱は大きくはなく、冷却速度は比較的早いでしょう。アニーリングの基本はゆっくり冷却です。
また、oligonucleotide anealing bufferはいろいろと報告されていますよね。塩濃度をそれらの濃度からあえて外す必要はあるのでしょうか。

>total10ulでも蒸発しなければ可能でしょうか?
蒸発しなければという過程に無理があるのでは?

>もしアダプター作成方法が記載されている本等をご存知でしたら教えてください。
http://www.google.com/search?q=oligonucleotide+anealing+protocol&tbm=bks
本を取り寄せるより、論文を検索したほうが早いと思いますが。

教えてくださいオリゴアダプター作成方法 削除/引用
No.1433-1 - 2012/08/21 (火) 23:09:06 - ringo1230
34merくらいのオリゴアダプターを作りたいと思っています。
具体的な作成方法がわからないのですが以下の方法でできますでしょうか?
アニールできる配列のオリゴをTEで同じ濃度(50nM)になるように溶いてそれぞれ5ul入れてPCR装置で95℃15minそのあと電源きればOKですか?
少ない量でつくりたいのですがtotal10ulでも蒸発しなければ可能でしょうか?
知識がないのでよろしくお願いします。

もしアダプター作成方法が記載されている本等をご存知でしたら教えてください。

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