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(無題) 削除/引用 No.145-3 - 2011/03/11 (金) 05:43:43 - おお >[Re:2] abさんは書きました : > どの程度までコントロールで確認したかによって事情も違ってきそうですが。 > 1. ビーズのみ > 3. ビーズとライセート > 5. ビーズとHAタグタンパク質を発現していない細胞のライセートと抗HA抗体 (上記は確認しているといっていいとおもいます5についてはHAタグタンパク発現ライセートでニュートラルな抗体を使ってますが、いまのところその辺にバンドが出てません。コントロール抗体自身が厳密性からしてちょっと危ういのですが、そこは詳細を省きます。) ちなみに何種類か違うモロクロで同じシステムでIP後WBしましたが同じ位置と思えるところにバンドが出ます。厳密な実験をした訳でないのではっきりとしたことはいえませんが。1次抗体のインキュベーションの長さに依存してそのバンドの強さが変わってくるのでもしかしたら１次抗体がトラップされていると思えます。 > 抗体由来としているので、だいたいの事は確認していると思いますが、念のためもう少し詳しい状況説明があった方がよいかも。 > ちなみに、抗HA抗体でWBしても、そのバンドは出るのでしょうか？ > 2. ビーズと抗HA抗体 > 4. ビーズと抗HA抗体とlysis buffer 裏をという実験としてたしかにこれはやるべきですが、同じような経験をされている方がいれば、解決が早いかとおもいとぴを上げた次第です。余裕があれば裏を取っていきたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.145-2 - 2011/03/11 (金) 04:43:56 - ab どの程度までコントロールで確認したかによって事情も違ってきそうですが。 1. ビーズのみ 2. ビーズと抗HA抗体 3. ビーズとライセート 4. ビーズと抗HA抗体とlysis buffer 5. ビーズとHAタグタンパク質を発現していない細胞のライセートと抗HA抗体 6. 他にもあるかも？ 抗体由来としているので、だいたいの事は確認していると思いますが、念のためもう少し詳しい状況説明があった方がよいかも。 ちなみに、抗HA抗体でWBしても、そのバンドは出るのでしょうか？

IP 抗体由来のノンスペ 削除/引用 No.145-1 - 2011/03/10 (木) 15:18:55 - おお IP で抗体(溶液)由来のノンスペが90kDaといった中途半端なところに出ます。還元剤はいれてます。マウスモノクロ(HA確かclone1。1)でIPし、ハイぶりドウマバイチをつかい(目的のものを検出するスペシフィックな抗体)、WB検出をし、Lさスペシフィックなもので70kDaあたりを見ようとしていました。。。コントロールやその他の比較からビーズ由来とかいうことはなさそうです。ライセート(input)にはそのあたりにバンドが見られません。

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