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定着したヒト細胞の同定法 トピック削除
No.277-TOPIC - 2011/04/09 (土) 18:28:24 - 修士見習いっ子
初心者な質問で申し訳ありませんが、教えて下さると助かります。

私は、現在ヒトの細胞を打ち込んだラットの組織中に、
どれくらいのヒト細胞が存在しているか?
その細胞がどう変化するか? ということを見ています。

その実験で、打ち込んで定着したヒト細胞を同定するために
ヒト核抗体(ANTI-HUMAN NUCLEI ANTIBODY、ミリポア?ケミコン?MAB1281)
という抗体を使い、免疫染色で確認を試みました。

しかし、いろいろ免染方法を変えて試しても、うまく染まりません。
試しにヒトの組織で染めたところ、核だけでなく細胞質もベターっと
染まったり、染まらない核も存在したりと、結果が安定しません。
他の研究室の、免染を専門にやっている技官さんにやってもらっても
同じような結果になってしまいました。

そこで質問なのですが、これ以外にヒトの細胞を同定する良い抗体
(できれば、どなたかが使用実績のある抗体)をご存じないでしょうか?
後々二重染色をしたいので、免染用の抗体が良いと思っています。
よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.277-7 - 2011/04/11 (月) 19:44:01 - mph
使用実績のある抗体があるかどうかはわかりませんが、
移植したヒト細胞とホストのラット組織を区別するのであれば、
HLA-A, B, Cなんて候補にならないんでしょうか?

MHCなら動物種でクロスすることも少ないと思うのですが・・・

(無題) 削除/引用
No.277-6 - 2011/04/10 (日) 19:47:44 - Actias
打ち込む前に、打ち込む予定の細胞とラット由来の細胞で染色の予備実験をやっておかないと、動物の無駄死にになる。

3Rを念頭に、動物実験をしてください。

(無題) 削除/引用
No.277-5 - 2011/04/10 (日) 19:03:09 - Boston-Pullman
予備実験でもちゃんとしたデータが必要かと思います。

もし、ヒト細胞が男性由来であれば、Y染色体のFISHは有効かと思います。

返答 削除/引用
No.277-4 - 2011/04/10 (日) 16:08:50 - 修士見習いっ子
>おおさま
たくさんの情報、ありがとうございます。
私も検索等はやってみましたが
(ヒト由来とかいう日本語でやってしまいました…)、
"Human specific"というキーワードで検索すればよかったのですね。
とても良い勉強になりました。ありがとうございました。


>Boston-Pullmanさま
そうですか、いろいろ考えると
実験をやりなおした方が良いということですか。
そうですね、とりあえず、今あるサンプルは
予備実験という位置づけにして、今後の
本実験については、まわりと相談してみます。
貴重なご意見、ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.277-3 - 2011/04/10 (日) 04:44:56 - Boston-Pullman
私は、lenti-GFPに感染させた細胞を移植しています。蛍光実体顕微鏡下で組織の切除が可能ですし、FACSにより細胞を単離して、再度移植することができます。

再現性を確認する必要もあるでしょうから、抗体を探す努力より、やり直すのが結果的にはやいと思います。reviewerからもクレームきますよ。

(無題) 削除/引用
No.277-2 - 2011/04/10 (日) 03:26:54 - おお
www.cellsignal.com/products/4359.html
IRAK1 Antibody (Human Specific) #4359

www.cellsignal.com/products/2010.html
Atg12 Antibody (Human Specific) #2010

www.cellsignal.com/products/2774.html
Bax Antibody (Human Specific) #2774

2010Atg12 Antibody (Human Specific) W IP IF-IC H
4223Bcl-2 (D55G8) Rabbit mAb (Human Specific) W IP H
2872Bcl-2 Antibody (Human Specific) W H
2871Phospho-Bcl-2 (Ser70) Antibody (Human Specific) W F H
2875Phospho-Bcl-2 (Thr56) Antibody (Human Specific) W H
2006BID (7A3) Mouse mAb (Human Specific) W H
2002BID Antibody (Human Specific) W IP H
2774Bax Antibody (Human Specific) W IP IHC-P H Mk
9494Caspase-7 (C7) Mouse mAb (Human Specific) W H
9749Cleaved Caspase-8 (Asp374) Antibody (Human Specific) W F H
9501Cleaved Caspase-9 (Asp330) Antibody (Human Specific) W IP H Mk
4193Cripto (D81B12) Rabbit mAb (Human Specific) W IP H
2020Cripto Antibody (Human Specific) W IP H
2070ENPP1 Antibody (Human Specific) W H
2782FADD Antibody (Human Specific) W H
2781Phospho-FADD (Ser194) Antibody (Human Specific) W H
3890HS1 (D83A8) XP(tm) Rabbit mAb (Human Specific) W IP IHC-P IF-IC F H
4503HS1 Antibody (Human Specific) W IP F H
4507Phospho-HS1 (Tyr397) Antibody W IP H
4359IRAK1 Antibody (Human Specific) W IF-IC H Mk
4921Phospho-I-kappa-B-beta (Thr19/Ser23) Antibody (Human Specific) W H (Mk) (Dg)
9546Cleaved PARP (Asp214) (19F4) Mouse mAb (Human Specific) W H
9541Cleaved PARP (Asp214) Antibody (Human Specific) W IHC-P IF-IC F H
9547Cleaved PARP (Asp214) Antibody (Human Specific) (Fluorescein Conjugate) IF-IC H
2285Thioredoxin 1 Antibody (Human Specific) W H
9502Caspase-9 Antibody (Human Specific) W F H
9505Cleaved Caspase-9 (Asp315) Antibody (Human Specific) W IP H
3017NF-kappa-B2 p100/p52 (18D10) Rabbit mAb (Human Specific) W IHC-P F H Mk

www.stemcellsinc.com/Tools-and-Technologies_SC-Proven-Product-Catalog/STEM121
www.stemcellsinc.com/Tools-and-Technologies_SC-Proven-Product-Catalog/STEM101


ぐぐるとでできた。
あなたの実験には使えるかわかりません。

定着したヒト細胞の同定法 削除/引用
No.277-1 - 2011/04/09 (土) 18:28:24 - 修士見習いっ子
初心者な質問で申し訳ありませんが、教えて下さると助かります。

私は、現在ヒトの細胞を打ち込んだラットの組織中に、
どれくらいのヒト細胞が存在しているか?
その細胞がどう変化するか? ということを見ています。

その実験で、打ち込んで定着したヒト細胞を同定するために
ヒト核抗体(ANTI-HUMAN NUCLEI ANTIBODY、ミリポア?ケミコン?MAB1281)
という抗体を使い、免疫染色で確認を試みました。

しかし、いろいろ免染方法を変えて試しても、うまく染まりません。
試しにヒトの組織で染めたところ、核だけでなく細胞質もベターっと
染まったり、染まらない核も存在したりと、結果が安定しません。
他の研究室の、免染を専門にやっている技官さんにやってもらっても
同じような結果になってしまいました。

そこで質問なのですが、これ以外にヒトの細胞を同定する良い抗体
(できれば、どなたかが使用実績のある抗体)をご存じないでしょうか?
後々二重染色をしたいので、免染用の抗体が良いと思っています。
よろしくお願いします。

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