Bio Technical フォーラム

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ＢＳＡへの非特異的結合 トピック削除
No.287-TOPIC - 2011/04/12 (火) 14:00:34 - あか
最近32P-GTPを使って、たんぱく質への付加活性を見ています。ところで、コントロールとしてのＢＳＡが非特異的にホットＧＴＰと結合してしまいます。反応サンプルをＳＤＳＰＡＧＥに流して、ラベリングされたたんぱく質のシングルバンドを検出することが出来ます。
いろんな反応条件を試したが、改善されませんでした。例えば界面活性剤をいれたり、塩濃度を上げたり。大変困っています。皆様からのアドバイスをぜひ聞かせてください。
よろしくお願い致します。
　
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(無題) 削除/引用
No.287-4 - 2011/04/13 (水) 10:50:14 - Boston-Pullman
どちらの活性を検出するにしても、BSAはその実験系のネガコンとして汎用されているのでしょうか？

あとポジコンと変わらないほどの強いシグナルなのでしょうか？ホットとコールドの比なり量を変えて差が出せれば良いのですが。

(無題) 削除/引用
No.287-3 - 2011/04/13 (水) 09:20:16 - qq
32P-GTPは、alpha-32P-GTPですか、gamma-32P-GTPですか？

＞たんぱく質への付加活性を見ています。
とは、具体的に何を意味しているのですか？あまり使わない用語です。Gたんぱく質のGTP結合活性を見たいのでしょうか？

(無題) 削除/引用
No.287-2 - 2011/04/13 (水) 08:51:50 - おお
Please describe more details of your experiments.
Do you want to see the kinase activity?

ＢＳＡへの非特異的結合 削除/引用
No.287-1 - 2011/04/12 (火) 14:00:34 - あか
最近32P-GTPを使って、たんぱく質への付加活性を見ています。ところで、コントロールとしてのＢＳＡが非特異的にホットＧＴＰと結合してしまいます。反応サンプルをＳＤＳＰＡＧＥに流して、ラベリングされたたんぱく質のシングルバンドを検出することが出来ます。
いろんな反応条件を試したが、改善されませんでした。例えば界面活性剤をいれたり、塩濃度を上げたり。大変困っています。皆様からのアドバイスをぜひ聞かせてください。
よろしくお願い致します。
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