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FACSについて トピック削除
No.398-TOPIC - 2011/05/14 (土) 00:23:36 - とんがり
最近、BD FACSAria Uを使ってセルソーティングを習っているのですが、
サンプルをセットせずにLoadしたりサンプルの液量が少なくなりすぎると
空気が入ってしまうのでしてはダメだと習いました。

素朴が疑問なのですが、空気が入ってしまった場合どのような不具合が
起こるのでしょうか。故障の原因になってしまうのでしょうか。

また、その場合の対処方法も合わせて教えて頂ければ幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.398-8 - 2011/06/02 (木) 00:13:24 - TK-1
> 最近、EtOHからの立ち上げをするとsweet-spotが安定しなかったり、
> 液量が十分にあるサンプルをloadしてもプロットが出る前にstreamが
> 止まりanloadされエラーメッセーが表示されることがあります。必ず、
> loadする前にはピペッティングをして凝集してないことを確認してます。
> 指導者も原因が分からないとのことでした。このような状態が、空気が
> 入ったときと近いような気がしたので質問した次第です。ただし、空気が
> 入ったという根拠はありません。

ethanolからの立ち上げというのは、fluidics startupのことですか?
streamやdropが安定しないのは、ノズルに問題があるわけではないですよね?

(無題) 削除/引用
No.398-7 - 2011/06/01 (水) 09:09:55 - ~
バッファーかキャリブレーションビーズを流しても同じ現象になるのでしたら、メーカーを呼んでいいレベルのトラブルだと思いますが。

(無題) 削除/引用
No.398-6 - 2011/05/31 (火) 19:50:58 - とんがり
皆様、ご教示ありがとうございます。

詳しく書き込みをした経緯を説明しますと・・・
最近、EtOHからの立ち上げをするとsweet-spotが安定しなかったり、
液量が十分にあるサンプルをloadしてもプロットが出る前にstreamが
止まりanloadされエラーメッセーが表示されることがあります。必ず、
loadする前にはピペッティングをして凝集してないことを確認してます。
指導者も原因が分からないとのことでした。このような状態が、空気が
入ったときと近いような気がしたので質問した次第です。ただし、空気が
入ったという根拠はありません。

(無題) 削除/引用
No.398-5 - 2011/05/18 (水) 20:55:49 - TK-1
こんなことを直接指導してくれている人にき書かないで、ここで赤の他人に聞く事自体がおかしい気もします。

ARIAの場合、air detectorがついているので、空気が入った時点でstreamが自動停止します。streamが流れていない状態でlaserがonになっていると、flow cellが焼けます。やりすぎるとdetectionに問題が生じますし、交換にそれなりのお金がかかります。

その他、意味があるのものもないものも含めていろんなローカルルールがあると思います。共同で使うものなら、そこの責任者の方ときっちりコミュニケートしてください。

(無題) 削除/引用
No.398-4 - 2011/05/18 (水) 14:02:55 - ~
何で故障の話が出てきたのでしょうか?
ダメだと説明されたのであって、故障するといわれたのではありませんよね。
シース液がさえれていなければ、電気的、機械的な負荷の影響はほとんど無いと思いますけど。
あるとしたら、液流が空気によって乱されることによって生じるのでしょうけれども、そこまで弱い装置では無いと思いますが。

空気が入った時点で、泡が蛍光測定に影響しますよね。
泡自体はFS,SSで除けても、泡と同じ液滴に入った細胞の測定もおかしくなるでしょう。
また、サンプルがない状態で空気を流しても、ソーティングはできないでしょう。
それが本来のダメだという話では。

(無題) 削除/引用
No.398-3 - 2011/05/18 (水) 12:03:55 - HIH
AriaIIは止まりません。

流しっぱなしにしてもすぐにどうこうなることはありませんが、やらないにこしたことはないです。

起こりうる問題についてもラインの寿命が縮まるとか半導体に負荷が生じるとか色々考えられるので結局問題が起こった際にBDに電話することになるだけです。

一つは・・・ 削除/引用
No.398-2 - 2011/05/18 (水) 10:19:16 - Aria使用者
まず、細胞浮遊液がなくなって吸えなくなると自動的にAriaは止まります。
streamが止まり、勝手にunloadされサンプルポートからFACS tubeが出てきます。そしてエラーメッセージが出るはずです。

故障に直結するとしたら、sorting中のようにvoltage(高電圧)がかかっている状態でハプニングがおこり、(voltageのかかっている)銀盤がやられた時です。確実に故障します。

後、サンプルの最後の方はどうしても細胞がたまりがちなのでギリギリまで吸うと一気に大量の細胞を吸い上げてしまうことになり、これまた自動的に止まってしまいます。

FACSについて 削除/引用
No.398-1 - 2011/05/14 (土) 00:23:36 - とんがり
最近、BD FACSAria Uを使ってセルソーティングを習っているのですが、
サンプルをセットせずにLoadしたりサンプルの液量が少なくなりすぎると
空気が入ってしまうのでしてはダメだと習いました。

素朴が疑問なのですが、空気が入ってしまった場合どのような不具合が
起こるのでしょうか。故障の原因になってしまうのでしょうか。

また、その場合の対処方法も合わせて教えて頂ければ幸いです。

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