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(無題) 削除/引用 No.454-3 - 2011/05/28 (土) 03:42:01 - protein 私も常々そのような疑問は持っていますが、まわりのflowerたちはあまり気にしていないようです。 確かにエッペンの場合はプレさんの仰る方法がぶれが少なそうですね。 プレートで染色しているのであれば、 デカントが全てのウェルで同じようになされると期待できるのでしょう。 ただ、5 mL tubeなどを使っているとなかなか厳しいので、私は以下のようにしています。 1. wash後にbufferを一定量足して、決まった量をピペットで取って 新しいチューブ内で染める。 2. ピペットマンを少なめの容量に合わせてアスピレートし、 チップを液につけたままダイヤルを回して液を吸いきるのを目安として液量を測る。 いずれも多数のサンプルを扱う実験には向いていませんが。 参考になれば幸いです。

(無題) 削除/引用 No.454-2 - 2011/05/27 (金) 22:37:33 - プレ 私は、液量はエッペンの横についた、おおまかな１００マイクロLの印でわざと１００マイクロ以上はアスピレータで吸わないことにしています。 だいたい液量はそろいますが、さらに最終的に液を入れ４００マイクロLとか希釈すると理屈ではもっとそろいます。一度、１００マイクロLプラスマイナス３０マイクロとかで、同一サンプルで差が出なければ、オーケーということではないかと思います。

フローサイトメトリーでの上清除去 削除/引用 No.454-1 - 2011/05/27 (金) 19:22:54 - belsize park 皆様、いつもお世話になっております。 非常に基本的なことで申し訳ありません。 フローサイトメトリーで、細胞を洗って遠心後の上清の処理に関してです。アスピレターで吸うのがいいのか、クイックモーションでデキャントするのがいいのかどちらがいいのでしょうか。 というのも、現在ヘキストでサイドポピュレーションを調べているのでが、同時にいくつかの抗体で染色をおこなっています。ヘキスト染色後、遠心し希釈した抗体を加えているのでが、デキャントでやると、どうしてもある程度の液体がチューブに残り、希釈した抗体をいれると、デキャント後の液体の残料がまちまちなため、抗体の希釈濃度がまちまちになってしまうと感じています。 細胞数が少なく、一検体あたり、総量100〜200マイクロなため、少しの残料でも大きな影響がありそうです。 液量を揃えるにしても、残量がわからないため、難しいです。 またデキャントでやると、少なからず細胞をロスしている感じです。アスピレターにしても、ペレットが見えないので、完全に上清を吸えないかと思います。 やりかたが基本的に間違っているのでしょうか。 まわりに聞く人がいなく、困っております。 どなたかお答え頂ければ、有り難いです。

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