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細胞が死んでいく トピック削除
No.6-TOPIC - 2011/02/11 (金) 20:44:35 - 頭茂
PBMCをFicollで分離後、トリパンブルーで染色し、カウントしている最中に細胞が次々と死んでいきました。

トリパンブルーがおかしいのかなと思い、トリパンブルーで染色せずに、細胞を観察していると、5分も経たないうちに次々細胞が破裂していっているようです。

このような事例を経験された方はいますでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.6-5 - 2011/02/12 (土) 04:28:58 - Boston-Pullman
本当にPBMCでしょうか?赤血球とか。

初めて単離しているような印象を受けるので、できるラボへ習いに行くのが良いかと思います。

(無題) 削除/引用
No.6-4 - 2011/02/12 (土) 03:49:31 - protein
血球計測盤をエタノールに浸らせて置いてあって、
エタノールを持ち込んでいるとトリパンブルーの偽陽性が
時間が経つにつれ増えて行きます。
破裂しているという事なので違うかもしれませんが。

削除/引用
No.6-3 - 2011/02/11 (金) 23:23:33 - ami
PBMCを水でSuspendしているとそういうこと起こる。

あとは、顕微鏡の光の熱が強すぎるとそういうこと起こるし、トリパンブルーのふたがゆるいと水が蒸発してどんどん濃くなって、そういうことが起こってくる。

やったことの詳細をもっと書けばたぶんわかる。

(無題) 削除/引用
No.6-2 - 2011/02/11 (金) 21:02:45 - yyy
もう少し詳細を書いた方が良いのではないでしょうか?
 
その手技の経験はどのくらいのあるのか?
懸濁液の組成
などくらいは書いても良いのでは?

細胞が死んでいく 削除/引用
No.6-1 - 2011/02/11 (金) 20:44:35 - 頭茂
PBMCをFicollで分離後、トリパンブルーで染色し、カウントしている最中に細胞が次々と死んでいきました。

トリパンブルーがおかしいのかなと思い、トリパンブルーで染色せずに、細胞を観察していると、5分も経たないうちに次々細胞が破裂していっているようです。

このような事例を経験された方はいますでしょうか?

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