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はがれやすい脳切片 トピック削除
No.833-TOPIC - 2011/08/26 (金) 05:43:13 - よろしくお願いします
クライオスタットで薄切した脳切片を薄切したその時にコーティングしたスライドグラスに直接貼り付け、染色(初めの水につけるだけで)を行ったところほぼ全てはがれてしまうことがあります。同じ条件で別の日に染色したものは全く問題なかったりし、何が原因なのか教えて下さいますでしょうか。
固定は灌流固定をし、数日〜数週後に凍結保存しています。
よろしくお願いします。
 
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ありがとうございました 削除/引用
No.833-5 - 2011/09/01 (木) 04:41:33 - よろしくお願いします
乾燥と常温化は出来ていると思います。というよりずっと常温で放置しています。どれくらい放置できるものなのでしょう。

PBSで試してみましたが、染色性も全く変わらず、剥がれ落ちないので水は駄目だと理解できました。

(無題) 削除/引用
No.833-4 - 2011/08/31 (水) 02:47:52 - ポスドク4
 冷凍庫から切片を取り出した後、常温に10分程度置き、乾燥と常温化を行うということはされましたでしょうか。

 あとは、別の方もおっしゃっているように、PBSを使うべきと思います。

ありがとうございます 削除/引用
No.833-3 - 2011/08/31 (水) 00:16:42 - よろしくお願いします
 詳しく教えてくださりありがとうございます。
 PBSで試してみようと思います。

(無題) 削除/引用
No.833-2 - 2011/08/29 (月) 14:30:18 - 組織
凍結切片の場合、既固定の切片であっても、最初にDWに漬けるとふやけた感じになり剥がれてしまうことがあります。免疫染色の場合は、プロトコール上どうしても固定が弱めになるからかなと思っています。パラフィン切片ではまず起こりませんね。

対応策としては、DWの代わりに、PBSにつけるようにすれば剥がれなくなると思います。

不思議なのは、一通り染色が終わった後(例えばDAB発色の後)だと、DWに長めに漬けても全く問題ないことですね。まあ剥がれなければ問題ないので、特に検証はしてませんが。

はがれやすい脳切片 削除/引用
No.833-1 - 2011/08/26 (金) 05:43:13 - よろしくお願いします
クライオスタットで薄切した脳切片を薄切したその時にコーティングしたスライドグラスに直接貼り付け、染色(初めの水につけるだけで)を行ったところほぼ全てはがれてしまうことがあります。同じ条件で別の日に染色したものは全く問題なかったりし、何が原因なのか教えて下さいますでしょうか。
固定は灌流固定をし、数日〜数週後に凍結保存しています。
よろしくお願いします。

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