皆様ありがとうございます。
nnnさん：
アガロース電気泳動でバンドを確認しましたが、やはりバンドは見えていませんでした。プライマー、プローブをかえてみることを考えてみます。ただ、このプライマーLotの一つ前に購入したプライマーで、以前PCRを実施した時は増幅されていましたが、一つ前のLotのプライマーで最近PCRを行っても全く増幅されない結果となっています。一つ前のLotのプライマーも劣化してしまった可能性も考えられると思いますが、何か根本的におかしいところがあるような気がしてなりません。抽象的で申しわけありません。
機器は、サイバーグリーンで別の遺伝子を増幅させたら問題なく反応し増幅されていましたので、問題はないのかなと思っております。
pさん：
サイバーグリーンで別の遺伝子を増幅させてみてら、問題なく反応し増幅されました。プラスミドについてですが、プラスミドに80bpの配列を組み込んだものを大腸菌に導入し、増幅させたものなので、純粋なプラスミド(+80bp)DNAです。プラスミドが劣化している可能性もあると思いますので、電気泳動で確認してみます。
ンンノさん：
一応、プローブは遮光に気を使い、蛍光灯の光にあったていたとしてもPCR master mix 溶液を調製し、分注した20分ぐらいであると思います。なのでおそらく大丈夫なのかと思ってはいます。
ハイジさん：
プライマーもABIからプローブとセットで購入しております。増幅しなくなってから、確かにプライマーのLotは変わっております。ただ、ややこしい話で申し訳ありませんが、このプライマーLotの一つ前に購入したプライマーで、以前PCRを実施した時は増幅されていましたが、一つ前のLotのプライマーで最近PCRを行っても全く増幅されない結果となっています。一つ前のLotのプライマーも劣化してしまった可能性も考えられると思いますが、それ以上に根本的に何かおかしいことがあるような気がしてなりません。抽象的で申し訳ありません。
皆様、状況を随時連絡するようにします。よろしくおねがいします。 |
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