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(無題) 削除/引用 No.10043-8 - 2021/11/17 (水) 20:23:45 - G25 先のリプライはNo.10043-5に対するもの。 No.10043-6のgenothypeはおそらくDH10B。DH5alphaと同様、IPTGなしでlac プロモータが動くやつ。 繰り返しますが、これはlacIの欠損ではなく野生型。lacI^qという変異体がリプレッサーを高発現してより強力にlacプロモータのleakを抑制するのです。 先の投稿で >NEB 5-alphaにF' proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) が加わったバージョン。青白セレクションができるようにデザインされているのでしょう。 F'なしのバージョンも青白選択はできるので、デザインのいとはそういうことじゃないですね。lacI^qでleakを押さえ、IPTGでinducibleにするためということか、

(無題) 削除/引用 No.10043-7 - 2021/11/17 (水) 20:10:02 - G25 F'因子を持っていて、それにlacI^q が入っているのでlacリプレッサー高発現系統です。 宿主株として使われる中でlacIを欠損しているのは無いんじゃないかな。 当該の系統はNEB 5-alpha F'Iqのようですね。 NEB 5-alphaにF' proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) が加わったバージョン。青白セレクションができるようにデザインされているのでしょう。 もし、大腸菌なら系統は何でも良いならそれに固執せず、NEB 5-alphaとかDH5alphaにしたら良いと思う。（先にも書いたようにlacI^q系統でもleakyh expressionするのでお示しの遺伝子型の系統でも、そこそこ光ると思うけど）。

(無題) 削除/引用 No.10043-6 - 2021/11/17 (水) 19:56:28 - GFP Genotype F– mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara-leu)7697 galU galK λ– rpsL(StrR) nupG 逆に等ラボには、上記もあるのですが、この系統はlac repressor は欠損していないという解釈でよろしいでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.10043-5 - 2021/11/17 (水) 19:50:42 - GFP アドバイスありがとうございます。私が勉強して、確認した限りでは、大腸菌は主にタンパク質算出目的とクローニング目的に分かれていて、以下のstrainはlac repressorを欠くという解釈でよろしいでしょうか。 DH5αかどうかは分かりませんが、K12由来でその亜型みたいなものでしょうか。 Genotype F' proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR)/ ∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15 e14- Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) 私の知識あっていますか？

(無題) 削除/引用 No.10043-4 - 2021/11/17 (水) 10:26:23 - G25 lacプロモーターのpAcGFP1でも、lacI^q系統でないDH5alphaなら相当光る。 lacI^q系統でもleaky expressionでかなり光る。 ちなみにDH5alphaはlacIの野性型、lacI^qは高発現変異だったと思う。

(無題) 削除/引用 No.10043-3 - 2021/11/17 (水) 10:04:11 - SYBR master lacIを持たないベクターでlac promoter下にあるGFP、例えばpAcGFP-1とかを、lac repressorを持たないホスト、例えばDH5 alphaにいれたら、勝手に発現しますよ。

(無題) 削除/引用 No.10043-2 - 2021/11/17 (水) 03:27:05 - おお https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigma/pp2358 これかな。

IPTG等を必要としないGFP 発現プラスミド 削除/引用 No.10043-1 - 2021/11/17 (水) 02:38:10 - GFP 大腸菌でのGFP強制発現を考えています。 形質転換した後に、抗生剤のみで、IPTG等を必要としないでGFPを強制発現させるプラスミドを市販品の中で探しているのですが、売っていますか？

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