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ドライアイス・アセトンを用いた試料凍結について トピック削除
No.10044-TOPIC - 2021/11/17 (水) 13:37:12 - SO
マウスを4% PFAで固定後に目的組織を摘出し，30% スクロース in PBSでスクロース置換を行った後に
O.C.Tコンパウンドに包埋（ドライアイス・アセトン中で急冷），スライスを作製するという方法で
凍結切片を作製し，免疫組織染色を実施しています。

ドライアイス・アセトン中に包埋容器を浸して凍結する際に，
誤ってアセトンが包埋容器の上に流れ込んでしまい，O.C.Tコンパウンドにアセトンが直接触れてしまいました。
このような形で凍結されてしまったサンプルでは，その後の染色に何らかの悪影響があるのでしょうか…？
ぜひご教授いただきたく存じます。
どうぞよろしくお願いいたします。
　
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(無題) 削除/引用
No.10044-3 - 2021/11/17 (水) 15:09:23 - G25
アセトンに接触したときの影響についてちょっとだけ言及がある。
https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=&cad=rja&uact=8&ved=2ahUKEwiWy9Xl0p70AhVQQd4KHcXBCCUQFnoECAMQAQ&url=https%3A%2F%2Fpathos223.com%2Ffor_student%2Fonepoint_histopathologic_technology%2F02.pdf&usg=AOvVaw0x4ptEXZNJAurZiKFcANTU

(無題) 削除/引用
No.10044-2 - 2021/11/17 (水) 14:28:07 - G25
OCTや組織片は親水性で、アセトンは親水性のある有機溶媒。
アセトンが直接触れるとOCTの希釈や溶出、組織の部分的な変性（アセトン再固定）のよる影響が懸念されます。染色に悪影響と言う前に、包埋の不均質で切りにくくなるかも。

むかしはこの目的でトライアイスにエタノールやアセトンが定番でしたけど、最近じゃイソペンタンとかノルマルヘキサンみたいな疎水性の溶媒使うのが流行りじゃないかな。これらだと、OCTや組織片に直接触れてもセーフだとのこと。

ドライアイス・アセトンを用いた試料凍結について 削除/引用
No.10044-1 - 2021/11/17 (水) 13:37:12 - SO
マウスを4% PFAで固定後に目的組織を摘出し，30% スクロース in PBSでスクロース置換を行った後に
O.C.Tコンパウンドに包埋（ドライアイス・アセトン中で急冷），スライスを作製するという方法で
凍結切片を作製し，免疫組織染色を実施しています。

ドライアイス・アセトン中に包埋容器を浸して凍結する際に，
誤ってアセトンが包埋容器の上に流れ込んでしまい，O.C.Tコンパウンドにアセトンが直接触れてしまいました。
このような形で凍結されてしまったサンプルでは，その後の染色に何らかの悪影響があるのでしょうか…？
ぜひご教授いただきたく存じます。
どうぞよろしくお願いいたします。
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