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(無題) 削除/引用 No.10073-3 - 2021/11/30 (火) 00:23:58 - ema ぽーさん ご経験を教えていただきありがとうございます。 私も、GFPではないですが、同じような経験がありましたので、今回はGFP-目的たんぱく質w/o METにしておりました。 >[Re:2] ぽーさんは書きました : > タンパク質の分解ではないですが、 > ｐEGFP-N1を使い、あるたんぱく質のC末端にGFPを融合させた際に、 > GFPの開始コドンからも翻訳が始まったことがあります。 > GFPの開始コドン（ATG）を欠損させると、単独のGFPタンパク質の発現が無くなるのを確認しています。 > > 目的のタンパク質の開始コドンからも翻訳は起こっていましたが、 > GFPの開始コドンからの翻訳の方が強かったと記憶しています。

(無題) 削除/引用 No.10073-2 - 2021/11/29 (月) 09:21:12 - ぽー タンパク質の分解ではないですが、 ｐEGFP-N1を使い、あるたんぱく質のC末端にGFPを融合させた際に、 GFPの開始コドンからも翻訳が始まったことがあります。 GFPの開始コドン（ATG）を欠損させると、単独のGFPタンパク質の発現が無くなるのを確認しています。 目的のタンパク質の開始コドンからも翻訳は起こっていましたが、 GFPの開始コドンからの翻訳の方が強かったと記憶しています。

発現させたGFP融合たんぱく質の分解 削除/引用 No.10073-1 - 2021/11/29 (月) 03:18:50 - ema 最近、あるたんぱく質のGFP融合たんぱく質を293に発現させました。融合たんぱく質はウェスタンで目的の位置に流れて、問題なく機能していました。この際、GFPと目的たんぱく質の間にはGGGGSリンカーがありました。 ある目的で、このGGGGSリンカーを外してGFPと目的たんぱく質を直接繋げました。 そのさい、ウェスタンでは分子量からみて、ちょうどGFPと目的たんぱく質の間で切断されているように認められました。これは目的たんぱく質の抗体を用いてわかりましたが、GFPの抗体で現在試しております。 今まで多くのGFP融合たんぱく質が作られてきていると思いますが、多くはリンカーを入れないと思います。クローニングでできた数アミノ酸は入る場合がありますが、同じような経験をされている方がいるのか、またどのようなプロテアーゼが機能しているのかが知りたいです。Expasyのようなサイトで調べてはおりますが、何かご存じの方がいましたらぜひお教えください。

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