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不安定 削除/引用 No.10142-5 - 2022/01/04 (火) 04:57:43 - oyaji lacZ(のα相補部分)、EGFPなどを発現させました。誘導を掛けて、発現が確認できる時と、そうでない時があります（ここが不安定）。 α相補の発現が、もっとも感度が高いようです（酵素反応による色素の蓄積を見るので）。蛍光蛋白遺伝子は、なかなか発現を確認できません。（蛍光装置の問題もあると思いますが、バックグラウンドの蛍光と区別が難しい） みなさま、本当にありがとうございます。 知らない文献もありました。大変参考になります。

(無題) 削除/引用 No.10142-4 - 2022/01/03 (月) 10:38:10 - るんぱん 「かつ、不安定になります。」とは何が不安定になるのですか。

(無題) 削除/引用 No.10142-3 - 2021/12/31 (金) 11:18:33 - おお >誘導用のプロモーター（lac や　arabinoseなど）を２つ入れると、発現量が下がります。 一つのプラスミドに２つ入れたということですよね。たしかpETDuetだっけかはT7のプロモーターがタンデムに並んでいたと思いましたが。

(無題) 削除/引用 No.10142-2 - 2021/12/31 (金) 11:16:08 - おお 実際にやってうまくいかなかったのかよくわからないことはありますが、抗体のリコンビナントを作るには２つのポリペプチドを同レベルに発現する必要があり、そういうテクノロジーは開発されていますのでそういう文献などを漁ればどうでしょうか？ https://www.nature.com/articles/ncomms9072 こちらの文献ではポリシストロニックなmRNAを発現しています。一つのRNAに２箇所のリボソーム結合配列（RBS）をおいて２つのタンパクが発現できるようにしているようです。 Constitutive ならシグマからpSF-OXBシリーズのプラスミドが販売されているようです。数種類プロモーターの強さのバリエーションがあるようです。使用経験はありません。 https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigma/ogs50 Recommended Productsにこのシリーズのプラスミド（低発現、中程度など）が見れると思います。

大腸菌で２遺伝子発現 削除/引用 No.10142-1 - 2021/12/30 (木) 17:19:23 - oyaji 大腸菌で２遺伝子発現をやってます。 誘導用のプロモーター（lac や　arabinoseなど）を２つ入れると、発現量が下がります。 かつ、不安定になります。 ２遺伝子とも、発現誘導をかけたいところですが、一つは、constitutive（定常発現）でも、良いと思います。両方同時に発現するpDuetのような誘導は、コンストラクト上、無理です。 抗生剤の耐性遺伝子用のプロモーターを使うのはどうでしょうか？ 発現量的には、低くなるかもしれませんが、、、 ２プラスミドを使う方法も考えましたが、発現量が相当異なること、できるだけシンプルにやりたいので、避けたいところです。 その他、良いアイデアがありましたら、ぜひ、ご教示願います。

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