全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.10143-5 - 2022/01/03 (月) 13:52:09 - No.20211117 toto様 返事遅くなってしまい申し訳ありません。 dishにくっついていない接着因子の存在を考えもしませんでした。 勉強になりました。ありがとうございます。 洗浄工程を入れてみます！

(無題) 削除/引用 No.10143-4 - 2021/12/31 (金) 23:49:36 - toto おそらく、dishに吸着してないゼラチンが残っていて、それが細胞に結合するのでばらつきを生んでるのではないでしょうか。乾燥させてもいいのだろうとは思いますが、私らは使用直前に1時間くらい室温でコートしてPBSでdishを一度リンスしてフリーの接着因子を除いてから、すぐに細胞を蒔いてます。

(無題) 削除/引用 No.10143-3 - 2021/12/31 (金) 21:52:33 - No.20211117 toto様 ありがとうございます！ やはり遠心のかけすぎでしたか、、、 そもそも遠心分離をしないという方法があるとは考えもしなかったです。 コーティングは以下の方法で行っています。 �@前日にゼラチン1%溶液に浸す �A継代直前に溶液を取り除いて乾燥 �B30から60分で細胞播種 この流れで修正した方がよいこと気を付けた方がよいことはありますでしょうか。 例えば乾燥させすぎないとか溶液を取り除きすぎないとか、、、

(無題) 削除/引用 No.10143-2 - 2021/12/31 (金) 10:42:58 - toto 多くの方からコメントが出ると思いますが、�@については、明らかに遠心のしすぎです。以前もこの点についてはあがっていました。剥がした細胞を回収するのは最小の遠心速度にしたほうがいいですし、あるいは遠心せずに血清を含む培地だけを加えて播種することも可能です。血清には大量のトリプシンインヒビターが含まれ、EDTAは培地中のMg2+で中和されるので。 �Aについては、もちろん洗浄すればコートはある程度は剥がれますが、接着力に影響を与えることはあまりないとは思います。最初のコーティングが不十分なのかな？コートの時間か、濃度を増やせばどうでしょうか。ひょっとしたら、dishのせいかもしれません。

継代作業に関して 削除/引用 No.10143-1 - 2021/12/30 (木) 22:10:58 - No.20211117 お世話になります。 生物の研究を始めたものです。 継代について質問があります。 �@遠心分離には細胞を回収すること以外に何か目的はありますか。例えば、トリプシンを取り除くためなどです。 遠心分離後にできた細胞の塊がすごく硬く、ピペッティングをたくさんしないとほぐれません。ぎりぎりまで回転数を下げてあげた方が細胞には良いのでしょうか。 �Aガラスにゼラチンやコラーゲンをコーティングしていますが、PBSで洗浄したり培地交換したりするとコーティングははがれてしまいますか？細胞の育ちがディッシュ毎で異なるので、コーティングがはがれてしまっているのかなと思いました。 初歩的な質問で大変申し訳ございません。よろしくお願いいたします。

全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---