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epitope tag トピック削除
No.10154-TOPIC - 2022/01/06 (木) 06:11:47 - おお
myc HA FLAGなどは昔からよく使われるタグで使用経験もあるのですが、その他についてはあまり詳しくありません。
まあ知識としてT7とかV5はなんとなく使われるのを知っている程度です。
そこでmyc HA FLAG以外のエピトープタグとそれに対する抗体について皆様の経験、良し悪しなど教えてほしいです。

novusbio.com/research-areas/epitope-tags
こちらを見るとV5の場合抗体が哺乳動物細胞などのタンパクとCross reactすることがあると書いてますね、、、
　
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No.10154-6 - 2022/01/12 (水) 20:18:38 - toto
がさんの書かれたように、私もアルファタグの圧勝と思ってて、これと、ちょっと落ちますがPeptagを使い分けてます。J. Biol. Chem. (2020) 295(45) 15307–15327に総説があります。どちらもnanobodyで大腸菌で沢山とれるので、抗体を買わないといけない従来型のエピトープタグの時代は終わったような気がしてます。
ところで、SpyTag003の使い勝手はどうですか？ちょっと意味が違いますが、興味あります。

(無題) 削除/引用
No.10154-5 - 2022/01/12 (水) 09:53:14 - mp
AGIA tagなどはどうでしょう。

ttps://seikagaku.jbsoc.or.jp/10.14952/SEIKAGAKU.2017.890302/data/index.html

使ったことはないですが、抗体は分与していただけるようです。

(無題) 削除/引用
No.10154-4 - 2022/01/12 (水) 08:37:26 - が
ALFA tag ；得意性とaffinityはすごくいいです。
SpyTag003; 共有結合


それぞれ結合するbinder; ALFA NanobodyとSpyCatcher003は大腸菌で簡単に作れます。

(無題) 削除/引用
No.10154-3 - 2022/01/12 (水) 03:45:12 - おお
Protein A-tag
Calmodulin binding protein-tag
Functionalなタグですね。ありがとうございました。このてのTagもProteomicなアプローチのためにいろいろ出てきたり、注目されたりしてよく目にするようになりましたね。

https://en.wikipedia.org/wiki/S-tag
ここをみると、短めのもので
FLAG-tag(DYKDDDDK)
HA-tag(YPYDVPDYA)
His-tag(HHHHHH)
Myc-tag(EQKLISEEDL)
Strep-tag(WSHPQFEK)
TC tag(CCPGCC)
NE-tag
S-tag
SBP-tag
Spot-tag
Isopeptag
SpyTag

といろいろ上がっているようですが、使用感などどんながんじかなと、、、
今回はあるCDSにオリゴDNAでTag配列を加えていこうと思うのでなにか短いものでヒト細胞で使いやすいものがないかと、、、

(無題) 削除/引用
No.10154-2 - 2022/01/06 (木) 13:30:38 - βjほいxでエア
Protein A-tag -----IgG Fc columnで精製　(pH2~3まで下げて溶出)

Calmodulin binding protein-tag------Calmodulin columnで精製（EGTAで溶出）

いずれのtagもタフなタンパク質なので一旦SDSなどで変性条件に晒しても、非イオン性界面活性剤を含むbufferで十分に希釈して変性剤の濃度を下げれば再生して結合能も回復する。tag自体が大きいので捕捉、精製に際して立体障害の影響を受けにくため回収率が良いです。

epitope tag 削除/引用
No.10154-1 - 2022/01/06 (木) 06:11:47 - おお
myc HA FLAGなどは昔からよく使われるタグで使用経験もあるのですが、その他についてはあまり詳しくありません。
まあ知識としてT7とかV5はなんとなく使われるのを知っている程度です。
そこでmyc HA FLAG以外のエピトープタグとそれに対する抗体について皆様の経験、良し悪しなど教えてほしいです。

novusbio.com/research-areas/epitope-tags
こちらを見るとV5の場合抗体が哺乳動物細胞などのタンパクとCross reactすることがあると書いてますね、、、
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