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(無題) 削除/引用 No.10229-5 - 2022/02/05 (土) 08:40:26 - G25 すでに指摘がありますが、 発現のチェックをするときはWhole lysate、lysateの上清(可溶画分)、沈殿(不要画分、封入体)別に泳動すべきですが、そうされてますか。

(無題) 削除/引用 No.10229-4 - 2022/02/05 (土) 08:35:31 - G25 一応、ベクターは何か明かしてください。 DH5alphaはタンパク質発現用に確立された宿主じゃないってところが気になります。効果のほどは保証できませんが、それなりの宿主に変えてみたらどうでしょう。 あとちゃんと発現する宿主ベクター系でも、コンストラクトによっては誘導しても顕著なタンパク質発現が見られないものもあります。組み込む断片の切り取り方とか、クローニングサイトを変えるとかで発現したりしなかったりってこともあります。

(無題) 削除/引用 No.10229-3 - 2022/02/05 (土) 03:35:43 - おお タンパクによってはCBBでは大腸菌のタンパクに埋もれて識別できない程度しか発現しないものも多いです。またInclusion bodyをつくって可溶化できていない可能性をLysateの作り方次第では疑う余地が出てきます。

(無題) 削除/引用 No.10229-2 - 2022/02/04 (金) 23:27:35 - qq SDS-PAGEの結果とは、CBB染色かそれともウェスタンブロットかしらねぇ？ プロモータがPlacというのは、それだけなのでしょうか？ そうであれば、プロモータが弱いからじゃない？ 発現させたい遺伝子は別にしてもプラスミド名を公開すべき。

タンパク質異種発現:IPTG誘導 削除/引用 No.10229-1 - 2022/02/04 (金) 22:02:54 - 日進月歩 お世話になっております。 本日は大腸菌を用いたタンパク質異種発現のIPTG誘導に関してお聞きしたいことがありましたのでトピックを作りました。 最近、大腸菌を用いたタンパク質異種発現を試みているのですが、IPTG誘導しても、SDS-PAGEの結果では、誘導なしサンプルに比べて、発現量が増えた様子が見られません。なぜでしょうか？ 以下に条件を記します。 宿主 DH5α プラスミドのプロモーター Plac 選択マーカー アンピシリン IPTG終濃度 1 mM 初歩的な質問かもしれませんが、コメント頂けますと幸いです。また、別に詳細な条件等が必要な場合は、可能な限りお伝えします。 よろしくお願いいたします。

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