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(無題) 削除/引用 No.12808-3 - 2025/01/30 (木) 04:24:05 - おお >[Re:2] T-2さんは書きました : > あとは血清になんらかのエストロゲンレセプターアゴニストが入っている可能性。 > FBSの原産国によっては母牛にホルモン剤が投与されている可能性は > ないのかなぁと邪推します。 > FBSのロットを変えてみては。 ホルモン除去したとされるCharcoal-stripped FBSというもの売られてますね。この手の実験で使われているかわかりませんけど。

(無題) 削除/引用 No.12808-2 - 2025/01/29 (水) 09:03:07 - T-2 同様の実験をされている先生方はいらっしゃると思うので 質問できる方に聞いてみるのが良いかとは思いますが、 培地に含まれるフェノールレッドはエストロゲンレセプターに作用することが 知られていると思います。Cre-ERで使われているのはおそらく変異型ERだと 思うのでどれくらいフェノールレッドが作用するか不明ですが、 フェノールレッドフリーの培地を試してみてはどうでしょうか。 あとは血清になんらかのエストロゲンレセプターアゴニストが入っている可能性。 FBSの原産国によっては母牛にホルモン剤が投与されている可能性は ないのかなぁと邪推します。 FBSのロットを変えてみては。

LSL-tdTomato由来の細胞がtomato陽性に...なぜ... 削除/引用 No.12808-1 - 2025/01/27 (月) 19:42:24 - tamoxifen 質問させてください。 LSL-tdTomatoのtransgeneを持ちつつ、lineage-specific Creのtransgeneを持つマウスからとある血球細胞を回収し、in vitroで培養しています。 細胞が増えたのちに、4-ヒドロキシタモキシフェンでin vitroでCreを活性化させ、その細胞でtdTomato陽性にしたいと思っています。 ところが、予想外なことに、その細胞は4-ヒドロキシタモキシフェンを加える前からtdTomato陽性でした。 germinal recombinationが原因ではないことは確認していますし、tamoxifenに曝していないマウスをサクリファイスする前に血球を取り出し、その細胞がtdTomatoを発現していないことも確認しています。 培養することでCreが陽性になったとしか考えられないのですが、培地は5% FBS in DMEMと、通常の培地です。当初考えていた実験計画が出来ず非常に困っております。 LSL-tdTomatoのtransgeneのみを持つマウスから単離した培養血球細胞のtdTomatoは陰性でした。 このことから、Cre依存的かつtamoxifen非依存的なtdTomatoの発現かと思います。 しかし、思い当たる節はなく、このようなことはよくあるのか、お聞きしたいです。 再度ですが、LSL-tdTomatoのtransgeneを持ちつつ、lineage-specific Creのtransgeneを持つマウスから採血し終えたばかりの血球細胞ではtdTomatoは発現していないです。一方、その細胞をガンガン増やして10日目あたりに解析するとtdTomato陽性でした。４-hydroxy tamoxifenには曝していないです。 ご教示いただけましたら幸甚です。

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