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(無題) 削除/引用 No.13032-12 - 2025/07/11 (金) 22:33:59 - 488 ありがとうございます。やってみます。

(無題) 削除/引用 No.13032-11 - 2025/07/11 (金) 14:28:03 - う うっすらピンクな感じ、です。

(無題) 削除/引用 No.13032-10 - 2025/07/11 (金) 13:21:44 - 488 >[Re:9] うさんは書きました : > 遠心するとペレットが白くなります。 このときの上澄みは赤っぽいんですよね？

(無題) 削除/引用 No.13032-9 - 2025/07/11 (金) 12:47:02 - う ペレットが真っ赤なのは溶血してなさそうですね。脾臓をストレーナーの上でつぶして遠心したペレットにACKバッファーを加えて放置、PBSを10mLとかファルコンチューブの上まで加えて中和して遠心するとペレットが白くなります。 私はFACSが詰まると怒られるもう一回ストレーナーを通しますれど、溶血するかとは別と思います。

(無題) 削除/引用 No.13032-8 - 2025/07/11 (金) 12:21:30 - 488 >[Re:7] うさんは書きました : > 私はよく効いてますよ。自分で作ってを使ってますが、売ってるのでも普通に効きます。 > 脾臓を懸濁液は赤茶だと思いますが、RBC lysisしてもう一度ストレーナーを通すと破裂した赤血球のカスの大きな塊がストレーナーに残りますし、遠心するとペレットが白くなります。 そうですか。自作も購入品も使ったことがあるのですが、遠心したペレットが真っ赤のままであまり壊れた感触がありませんでした。Lysisしてから再びストレーナーに通すといいのでしょうか。Lysisしてからそのまま遠心すると赤いカス？が下に落ちるとか？たまたま以前の手技が悪かっただけでしょうか

(無題) 削除/引用 No.13032-7 - 2025/07/11 (金) 11:39:42 - う ＞ACKバッファー効きますか？使ったことがあるのですがイマイチ効いてる実感がなかったんですよね。でも除去しないとやはり邪魔ですよね 私はよく効いてますよ。自分で作ってを使ってますが、売ってるのでも普通に効きます。 脾臓を懸濁液は赤茶だと思いますが、RBC lysisしてもう一度ストレーナーを通すと破裂した赤血球のカスの大きな塊がストレーナーに残りますし、遠心するとペレットが白くなります。

(無題) 削除/引用 No.13032-6 - 2025/07/11 (金) 00:48:39 - 488 >[Re:4] うさんは書きました : > > > ＞このPBS > > というのが、脾臓を潰してストレーナーを濾すとき、ならどっちでも良いと思いますけれど、私は面倒なのでずっとBSA/EDTA入りを使ってます。FBSでも良いと思います。Fcblockerは入れた方が良いと思います。 ありがとうございます。凝集しちゃうかなと思ったのですがとりあえずPBSで潰してみます。Fc blockはStainのときにやる予定です。

(無題) 削除/引用 No.13032-5 - 2025/07/10 (木) 21:41:41 - 488 ACKバッファー効きますか？使ったことがあるのですがイマイチ効いてる実感がなかったんですよね。でも除去しないとやはり邪魔ですよね

(無題) 削除/引用 No.13032-4 - 2025/07/10 (木) 15:10:45 - う ＞このPBS というのが、脾臓を潰してストレーナーを濾すとき、ならどっちでも良いと思いますけれど、私は面倒なのでずっとBSA/EDTA入りを使ってます。FBSでも良いと思います。Fcblockerは入れた方が良いと思います。

(無題) 削除/引用 No.13032-3 - 2025/07/10 (木) 10:25:16 - う 赤血球は大量にあるので除去しないと最初のFSC/SSCでゴミのように映って、リンパ球が紛れてしまいます。 赤血球は、ACKリシスバッファーですぐ簡単にのぞけます。

(無題) 削除/引用 No.13032-2 - 2025/07/10 (木) 10:11:18 - TS そんなに詳しくないのですが、溶血バッファー（塩化アンモニウムだったか）で赤血球を除去するのが一般的じゃないかと思います。

マウス脾臓でフローサイトメトリー練習、赤血球除去 削除/引用 No.13032-1 - 2025/07/10 (木) 01:21:59 - 488 フローサイトメトリーの練習をしようと思います。マウスの脾臓を取り出してスマッシュし、PBSで洗って免疫系の抗体反応をさせて流そうと思います。CD3,4,8,19,もう一つくらい、ゲーティングやコンペンセーションの練習をしようと考えています。 このとき赤血球除去しないとフローに流したとき邪魔でしょうか？また、脾臓をスマッシュしてPBSに入れるのですが、このPBSに例えばEDTAやFBSが入っていたほうがいいなどありますでしょうか？抗体反応はとりあえず2%BSA/PBSでインキュベーションしようと考えています。 ご経験があるかた、コツを教えてくれるとありがたいです。

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