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RNA抽出時のクロロホルムはピペットマンでとっていいのですか？ トピック削除
No.13086-TOPIC - 2025/08/26 (火) 00:22:41 - トリゾール
こんばんは。
RNAをマウス増加から抽出するためにトリゾールを使っていますが、クロロホルムを0.2 mlとりたいのですが、揮発したクロロホルムがピペットマンを腐敗させるとか、0.2吸ってもポタポタ垂れるので正確じゃないとか聞いたりします。

ピペットマンは飼ってもらったものなので大事に使いたいので、クロロホルムには使いたくないと思ってしまいます。

みなさんはどうやってクロロホルムを正確にとっていますか？
　
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(無題) 削除/引用
No.13086-5 - 2025/08/31 (日) 12:33:13 - G25
同じギルソンピペットマンを30年以上使っていて、PCI抽出しまくっていた時期もありますが、有機溶媒による摩滅、故障はありません。
もちろん消耗品のOリング交換などのメンテナンスはしています。
万が一、クロロフォルムを直接ノーズにつけてしまって摩滅したなんてことがあれば、ノーズだけ交換すればよろしい。ピペットマンはそれができるデザイン、サポート体制です。

揮発性の液体が蒸気圧によってチップから漏出する件については最終的に吸い上げる前に液体中で何度かピペッティングしてチップ内を蒸気で飽和させるという方法が添付説明書にもかいてあったはず。ちなみに連続ピペッティングの時便利で合理的なリバースピペッティングについても記載があるます。
ピペットくらいで説明書読まんという人もいそうですが、正しく適切な使用法を知らない人が案外多い。

(無題) 削除/引用
No.13086-4 - 2025/08/26 (火) 05:47:50 - あの
以前にトリゾルを使っていたときは、ピペットマンP1000にフィルターチップをつけて、0.2mlのクロホを吸うのに使っていました。

できるだけ、ピペットマン本体からの距離をあけるために、P200は使いませんでした。

気休めかもしれないけど、フィルターチップの方が、ピペット本体に入るガスの量も少ないだろうと考えていました。

ただし

トリゾルの世代の抽出系を使わなくなって、10年以上です。現在は、クロホが不要な系だけ使っています。

(無題) 削除/引用
No.13086-3 - 2025/08/26 (火) 02:18:08 - おお
１mlぐらいのガラスのピペットを使うというのは手ではありますね。まあポリスチレン製のピペットで測ってすぐ出すには見た目傷んでないのでセーフ的な使い方している人もいますが。

(無題) 削除/引用
No.13086-2 - 2025/08/26 (火) 02:12:54 - おお
使ってはいますね。ただしメーカー（安物？）によっては材質がポリスチレンで全くクロロフォルムに耐性がない素材だったりすることもあります。

普通はポリプロピレンを材質として使っていて、ポリプロピレンはクロロフォルムに完全に耐性ではありませんが、経験的には（頻度によるのでなんとも言えませんが）、数年は一応使えてます。フィルターチップを使うことでなるべく揮発したクロロフォルムの流入を防ぐとかいう話はあります。

正確に取るには、何回か吸い出しして揮発した溶媒を飽和させること、reverse pipetting（余分に吸い取って、必要量だけ押し出す）を行うことが推奨されているようです。個人的にはあんまり正確性は必要ないと思っているのであまり気にしてませんが。

それでも経年劣化を早めるという事は否定できませんので、有機溶媒などは別のメカニズムのピペットを用意することを勧めているのも見かけます。Positive Displacement Pipettesと言うやつでチップにピストンがついていてピペッターに揮発した溶媒などが直接触れないようになっている。ただし、経験上そういうのを使っているのは見たことがないですね。やっている実験によるのでしょうけど。

RNA抽出時のクロロホルムはピペットマンでとっていいのですか？ 削除/引用
No.13086-1 - 2025/08/26 (火) 00:22:41 - トリゾール
こんばんは。
RNAをマウス増加から抽出するためにトリゾールを使っていますが、クロロホルムを0.2 mlとりたいのですが、揮発したクロロホルムがピペットマンを腐敗させるとか、0.2吸ってもポタポタ垂れるので正確じゃないとか聞いたりします。

ピペットマンは飼ってもらったものなので大事に使いたいので、クロロホルムには使いたくないと思ってしまいます。

みなさんはどうやってクロロホルムを正確にとっていますか？
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