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(無題)
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No.13144-5 - 2025/10/16 (木) 17:27:28 - 774R
ですね。
「このプラスミドの発現は導入後もずっと安定している」
と書かれてるので、プラスミドの状態で安定維持されるかを問うてるように思います。
(無題)
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No.13144-4 - 2025/10/16 (木) 14:56:03 - ぽいう
環状のプラスミドをトランスフェクションして、薬剤選択をすればずっと発現し続けるか?と聞いている気がするのは私だけ?
(無題)
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No.13144-3 - 2025/10/16 (木) 13:43:43 - 774
薬剤選択後の細胞はプラスミドの薬剤耐性に関わる部分が導入されて機能していることを担保するだけですが、プラスミドがインテグレーションされている場合が多いとは思います。
目的の遺伝子の発現が安定して続くか?ということに関しては、インテグレーションされた場所、直鎖状になったプラスミドの構造、プロモーターの性質(メチル化とかでサイレンシングされやすい等)によると思われます。
(無題)
削除/引用
No.13144-2 - 2025/10/16 (木) 13:37:38 - asan
>薬剤による選択を行った場合、このプラスミドの発現は導入後もずっと安定していると考えてよいのでしょうか?
ランダムインテグレーションでの耐性マーカーでのセレクションは100%発現してる細胞集団だけが濃縮されません。細胞によると思いますが基本的にはシングルクローン化して妥当な発現量のものを取ってくるのが一般的です。
導入したプラスミドの安定的な発現
削除/引用
No.13144-1 - 2025/10/16 (木) 13:09:58 - えき
プラスミドを細胞株にトランスフェクションしています。
薬剤による選択を行った場合、このプラスミドの発現は導入後もずっと安定していると考えてよいのでしょうか?
また、みなさんがお使いの試薬でトランスフェクションにおすすめの試薬があれば教えていただけないでしょうか?
よろしくお願いします。
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