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(無題) 削除/引用 No.13177-2 - 2025/12/11 (木) 13:47:15 - １ だいぶ前の実験ですので、3次元培養してた時に、コーニングのセルリカバリーソリューションというのを使ってました。時々手で静かに震盪しながら低温〜氷中で置いておくと30min-1hrくらいでゲル(Geltrex)はなくなり細胞が分散しました。細胞の生存率も良かったです。ゲルのメーカーや種類で違うかもしれませんが。

オルガノイドのゲル除去がうまくいかない 削除/引用 No.13177-1 - 2025/12/10 (水) 02:54:54 - DEM Geltrex Flex LDEV-Free Reduced Growth Factor Basement Membrane Matrixをオルガノイドに使用しています。継代の際に、２つ問題があります。 １．ゲルが完全に除去できない。 論文のプロトコールを見ると、氷冷を１時間行うとほぼゲルが溶解して、その後のTriplex処理で細胞を分解するとあるのですが、なぜかゲルが溶解しません。その後のTriplex処理をしつこく行うと、ゲルが分解し始めます。そもそもゲルが氷冷で溶けるというのが間違っているのではないかと思っているのですが、どうなんでしょうか。STAR protocolを参考にしているので、そこまでいい加減なプロトコールではないと思っているのですが。 ２．また、おそらくDNAだと思うのですが、細胞の沈殿を作ると、粘性が高くなり、沈殿しないあるいは、遠心後に上澄みを除去しようとすると、距離があって、細胞がピペット動作に引っ張られる。アスピレーターで吸引しようものなら、細胞が吹っ飛んでしまいます。 これはDNaseを加えたらいいんでしょうか。プロトコールにはありませんが。

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